In Vivo Quantification of Intramolecular FRET Using RacFRET Biosensors.
基因编码的FRET生物传感器是可视化活体细胞与组织中蛋白活性和信号事件的重要工具。与生化方法相比，FRET生物传感器可在活体中非侵入性地实现信号过程的空间—时间检测。尽管该技术概念相对简单，但实验流程复杂，包括传感器优化、数据采集和图像处理三个步骤，每一步均存在挑战。本章重点讨论数据采集与图像处理，并以分子内RacFRET生物传感器...
Rapid activation of Rac GTPase in living cells by force is independent of Src.
机械力对维持人体各组织器官功能至关重要，但机械力如何在细胞和分子水平转导为生化活性仍不清楚。本研究采用磁扭转细胞力学技术，通过经跨膜黏附分子整合素结合到细胞表面的磁珠，对活人气道平滑肌细胞施加局部机械应力。利用荧光共振能量转移（FRET）方法量化小GTP酶Rac的时空激活：以ECFP为供体、YPet为受体，通过二者荧光强度比反映Ra...
Determination of hierarchical relationship of Src and Rac at subcellular locations with FRET biosensors.
基于荧光共振能量转移（FRET）的基因编码生物传感器能够以高时空分辨率在活细胞中可视化信号事件，但其灵敏度有限，限制了广泛应用。本研究将增强型青色荧光蛋白（ECFP）与黄色荧光蛋白变体 YPet 配对，构建 ECFP/YPet FRET 对。该 FRET 对可显著提高多种信号分子生物传感器的灵敏度，包括酪氨酸激酶 Src、小 GTP...