Spatiotemporal Quantification of Cytosolic pH in
离子特异性探针和荧光指示剂在阐明离子信号（尤其是钙、质子和阴离子）在植物发育中的作用中至关重要，为监测细胞内离子动态的时空变化提供了可靠方法。质子/pH 整合到信号机制中尤其重要，但要在单细胞水平获得高时空分辨率的定量估计仍是重大挑战。本文详述了在拟南芥（Arabidopsis thaliana）花粉管中表达遗传编码 pH 敏感报告...
A label-free real-time method for measuring glucose uptake kinetics in yeast.
葡萄糖摄取检测通常依赖同位素标记糖，会产生放射性废物并使实验人员暴露于辐射。本文报道一种无标记、实时测定酵母葡萄糖摄取动力学的方法。作者发现，饥饿的 Saccharomyces cerevisiae 细胞在受到葡萄糖脉冲后，胞质 pH 的快速下降依赖于糖摄取速率，因此可作为糖转运体动力学参数测定的替代指标。实验采用 pH 敏感绿色荧...
Live imaging of intra-lysosome pH in cell lines and primary neuronal culture using a novel genetically encoded biosensor.
溶酶体生理紊乱日益被认为是多种神经发育障碍和衰老相关疾病的重要病理基础，其中溶酶体酸化缺陷可触发溶酶体应激信号并削弱蛋白水解能力。本研究开发了一种基因编码的比率型荧光探针RpH-LAMP1-3xFLAG，将pH敏感荧光蛋白pHluorin与参考荧光蛋白mCherry串联融合于小鼠LAMP1的腔内结构域，并在胞质侧引入3xFLAG纯化...
Probing chemotaxis activity in Escherichia coli using fluorescent protein fusions.
细菌趋化信号有望用于快速生物传感器检测，但难以定量。本文探索两种可反映趋化活性大肠杆菌的荧光读出。第一种将趋化信号蛋白 CheY 和 CheZ 分别与稳定或不稳定“分裂”绿色荧光蛋白的非荧光部分融合。野生型趋化细胞可产生可区分荧光焦点，而缺乏 CheA 激酶的突变体不能；约三分之二焦点位于细胞极的趋化受体处，三分之一位于鞭毛马达复合...
Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue.
细胞内pH（pHi）变化在代谢、增殖和分化等细胞功能调控中发挥重要作用。传统上，pHi动态多在培养细胞中测定，但新工具使完整活组织中的pHi研究成为可能。在果蝇研究中，携带pHi生物传感器mCherry::pHluorin的转基因品系是关键进展。本文描述了一套常规用于活体果蝇卵巢小管成像的方法，用于测定野生型mCherry::pHl...
A new fluorescence-based method to monitor the pH in the thylakoid lumen using GFP variants.
ΔpH 依赖/Tat 途径仅利用质子动力势驱动蛋白质跨叶绿体类囊体膜运输。9-氨基吖啶荧光淬灭法常用于监测光照下类囊体膜两侧 ΔpH，但对低 ΔpH 值敏感性有限，且膜结合会产生虚假荧光信号。为开发更敏感、能监测类囊体腔真实 pH 的方法，作者将比率型 pH 敏感 GFP 变体 pHluorin 与 prOE17 转运肽融合，转入拟...
Ratiometric imaging of pH probes.
本章介绍利用比值法荧光成像测量细胞内 pH（pHi）的工具与方法。作者系统讨论了两类常用 pH 敏感探针：化学荧光染料（如 BCECF 和 SNARF）和基因编码 pH 生物传感器（如 pHluorin 及 mCherry-pHluorin 融合蛋白）。这些探针可在全 mount 组织、单个细胞、细胞膜、细胞器及亚细胞区室等尺度上检...
pH sensing by FAK-His58 regulates focal adhesion remodeling.
细胞内pH（pHi）动态调控多种细胞过程，包括黏着斑重塑。本文报道黏着斑激酶（FAK）这一黏着斑重塑关键调控因子是一种可响应生理pH变化的pH传感器。FAK激活的第一步是Tyr397自磷酸化，该磷酸化水平随pHi升高而增加。作者利用基因编码生物传感器显示，在细胞铺展过程中，随着黏着斑成熟，黏着斑局部pH升高。进一步发现，pHi降低的...