De Novo Design of High-Performance Cortisol Luminescent Biosensors.
频繁、可靠的皮质醇检测对诊断和管理肾上腺疾病、应激反应及昼夜节律紊乱至关重要。现有皮质醇检测主要依赖酶联免疫吸附测定（ELISA）或液相色谱-串联质谱（LC-MS），需实验室完成，难以满足现场即时检测需求。蛋白生物传感器可通过分析物诱导的构象变化直接调控报告模块活性，实现混合即读，但尚无稳健的现场可用皮质醇蛋白传感器。本研究从头设计...
Experimental and Analytical Framework for "Mix-and-Read" Assays Based on Split Luciferase.
免疫检测如酶联免疫吸附试验（ELISA）在即时检测中常受限于蛋白固定化、多步结合与洗涤。本文提出基于分裂荧光素酶的简单模块化“混合即读”酶互补实验与分析框架，用于溶液中分析物的敏感检测与定量。针对目标分析物非重叠表位的两个工程化蛋白结合子分别融合到无活性荧光素酶片段，形成生物传感器探针。通过酵母表面展示从Sso7d突变组合库分离靶向...
Split-luciferase complementary assay of NLRP3 PYD-PYD interaction indicates inflammasome formation during inflammation.
NLRP3炎性小体是固有免疫系统中响应多种刺激并激活炎症信号级联的关键大分子复合物。结构研究表明，胞质受体NLRP3受刺激后寡聚化，并作为支架形成ASC丝状结构，从而激活procaspase-1。尽管已有大量NLRP3炎性小体结构证据，但NLRP3 pyrin结构域（PYD）的相互作用及其功能意义仍不清楚。本研究采用分裂荧光素酶互补...
Novel biosensor using split-luciferase for detecting vitamin D receptor ligands based on the interaction between vitamin D receptor and coactivator.
维生素D受体（VDR）配体，如1α,25-二羟基维生素D3 [1α,25(OH)2D3]及其类似物，因在I型佝偻病、骨质疏松、银屑病、白血病和癌症等疾病治疗中的潜在临床应用而受到研究。此前，我们报道了一种基于分裂荧光素酶的生物传感器，可在短时间内检测VDR配体并评估其与VDR配体结合域（LBD）的亲和力。然而，若要检测血浆中1α,2...
Novel split luciferase-based biosensors for evaluation of vitamin D receptor ligands and their application to estimate CYP27B1 activity in living cells.
本研究报道了一种基于分裂荧光素酶的新型生物发光传感器，用于在体内外评价维生素D受体（VDR）配体。此前构建的 LucN-LBD-LucC 传感器由萤火虫荧光素酶 N 端片段（LucN）、VDR 配体结合域（LBD）和 C 端片段（LucC）融合而成，VDR 配体结合后荧光素酶光强下降，虽可快速检测但灵敏度不足。为此，作者将参与 LB...
A LATS biosensor screen identifies VEGFR as a regulator of the Hippo pathway in angiogenesis.
Hippo通路是组织发育与稳态的核心调控网络，并参与血管发育。本文开发了一种基于生物发光的LATS生物传感器（LATS-BS），用于实时、非侵入性监测Hippo通路核心激酶LATS的活性。该传感器由Nluc-YAP15和14-3-3-Cluc两个分裂荧光素酶融合蛋白组成：当LATS磷酸化YAP15的S127位点后，14-3-3结合磷...
Split luciferase-based biosensors for characterizing EED binders.
胚胎外胚层发育蛋白（EED）是多梳抑制复合物2（PRC2）的亚基，通过结合H3K27me3前馈调控PRC2甲基转移酶活性。作者近期发现一类结合EED H3K27me3口袋的新型变构PRC2抑制剂（EEDi）。为鉴定和表征该抑制剂，作者开发了多种检测，其中一种是基于EED[G255D]突变体与分裂萤火虫荧光素酶构建的遗传编码EED生物...