Monitoring TRPC7 Conformational Changes by BRET Following GPCR Activation.
瞬时受体电位经典通道（TRPC）是参与钙离子稳态调控的膜蛋白，其功能受G蛋白偶联受体（GPCR）调节。本研究构建了两种分子内生物发光共振能量转移（BRET）生物传感器，即GFP10-TRPC7-RLucII和RLucII-TRPC7-GFP10，用于在受体激活后监测TRPC7构象变化。作者先在HEK293细胞中瞬时表达不同GPCR和...
Discovery of fragments inducing conformational effects in dynamic proteins using a second-harmonic generation biosensor.
蛋白质功能常依赖配体诱导的构象变化，但常规生物物理筛选通常不能直接揭示配体如何影响其功能。本文开发了一种高通量第二谐波产生（SHG）生物传感器，用于实时检测与蛋白结合后诱导构象变化的片段并识别动态区域。作者以乙酰胆碱结合蛋白（AChBP）为模型，建立野生型和六个单半胱氨酸突变体的多孔板SHG检测体系，并通过胺基或马来酰亚胺化学偶联第...
Experimental study of the evanescent-wave photonic sensors response in presence of molecular beacon conformational changes.
本文报道了分子信标（MB）探针构象变化对倏逝波光子传感器识别核酸目标寡核苷酸影响的实验研究。研究采用基于硅光子带隙（PBG）结构的高灵敏度光子传感器，MB探针通过5′端巯基固定于传感器表面，并在3′端附近引入生物素基团，以选择性结合链霉亲和素（streptavidin, St）。通过比较St标记与未标记MB探针在目标寡核苷酸检测中的...
Rapid Detection of Dynamic PTEN Regulation in Living Cells Using Intramolecular BRET.
肿瘤抑制蛋白PTEN磷酸酶通过去磷酸化磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸，负调控PI3K/AKT通路，从而抑制细胞增殖、存活和迁移。PTEN功能异常与多种癌症相关，除基因突变外，其构象、定位、活性和稳定性等翻译后调控改变也可导致功能抑制。本文介绍一种基于分子内生物发光共振能量转移（BRET）的遗传编码生物传感器，用于在活细胞中快速监测...
Design and construction of conformational biosensors to monitor ion channel activation: A prototype FlAsH/BRET-approach to Kir3 channels.
离子通道在神经与肌肉兴奋性、激素分泌、骨重塑、免疫应答和细胞增殖等生理过程中发挥关键作用，靶向离子通道的药物是新型治疗剂的重要方向。本文报道了一种实时监测通道蛋白在药理学刺激下发生构象变化的方法。该方法通过监测生物发光共振能量转移（BRET）的变化来追踪通道蛋白的结构重排。为验证原理，作者以 Kir3 神经元通道为模型，构建了 10...
Designing BRET-based conformational biosensors for G protein-coupled receptors.
配体偏倚信号开始对制药行业的药物发现项目产生重要影响，并重新激发了人们对药理学效价的理解。因此，许多研究者和筛选活动现在被导向单个G蛋白偶联受体（GPCR）下游更大范围的信号反应。许多基于生物传感器的平台已被开发用于捕获信号特征。尽管我们利用这些信号特征的能力不断增强，但仍受制于信号特征可能仅针对某种细胞类型，因此我们的平台可能无法...
A biosensor to monitor dynamic regulation and function of tumour suppressor PTEN in living cells.
肿瘤抑制蛋白PTEN是一种脂质磷酸酶，通过去磷酸化PIP3负调控PI3K/AKT通路。直接、快速、灵敏地监测PTEN构象与功能，是开发增强或恢复PTEN依赖性通路抗癌药物的重要前提。本文构建了一种分子内生物发光共振能量转移（BRET）生物传感器Rluc-PTEN-YFP，将Rluc融合于PTEN N端、YFP融合于PTEN C端，用...
Real-time study of interactions between cytosine-cytosine pairs in DNA oligonucleotides and silver ions using dual polarization interferometry.
本研究利用双偏振干涉（DPI）实时研究富含胞嘧啶（C）的单链DNA寡核苷酸与银离子（Ag+）结合时的构象变化。加入Ag+后，Ag+选择性结合胞嘧啶−胞嘧啶错配位点并形成C−Ag+−C复合物，使富含C的单链DNA由随机卷曲构象转变为双链构象；而不含C−C错配的对照DNA无此信号，与圆二色性（CD）表征一致。DNA构象变化反映为DPI解...
Distinct conformational changes in beta-arrestin report biased agonism at seven-transmembrane receptors.
β-arrestin 通过抑制 G 蛋白信号并启动 β-arrestin 依赖信号，关键调控七次跨膜受体（GPCR/7TMR）。偏向性配体和受体突变使 G 蛋白介导与 β-arrestin 介导信号可药理学分离，但 β-arrestin 双重功能的分子机制仍不清楚。作者利用 β-arrestin 2 的分子内生物发光共振能量转移（B...