突触核蛋白病是一组以病理性α-突触核蛋白（α-Syn）进行性积累为特征的神经退行性疾病。α-Syn淀粉样聚集体存在结构多态性，可能决定不同疾病表型与进展，但机制不清。本研究采用荧光寿命成像显微镜（FLIM）及其phasor无拟合分析方法，在表达α-SynA53T-YFP报告蛋白的生物传感器细胞系中监测体外制备α-Syn纤维多态体的种...
半胱氨酸残基的 S-亚硝基化是多种蛋白质动态翻译后调控和氧化还原调节的重要机制。许多荧光蛋白（FP）含有半胱氨酸，GFP 衍生荧光蛋白中两个高度保守的 Cys 残基为发色团自催化形成提供有利微环境。尽管荧光蛋白 25 年来一直是细胞生物学工具，但一氧化氮（NO）对其荧光性质的影响此前未被研究。本文考察蓝色发射荧光蛋白 mTagBFP...
亚细胞pH变化在代谢、膜运输及治疗载体释放中起关键作用。现有pH测量多依赖pH敏感荧光团的强度变化，但强度法受传感器浓度、信噪比下降和需要参考荧光团等限制，推断pH不确定度高。本文提出将pH依赖荧光寿命成像显微镜（pHLIM）与深度学习结合，用于在单个囊泡水平准确定量活细胞亚细胞pH。作者将pH敏感荧光蛋白mApple分别融合至细胞...
淀粉样蛋白β（Aβ）肽在神经元内产生，部分释放至脑实质，部分保留在胞内。由于抗Aβ抗体同时捕获Aβ及其前体蛋白APP和C99，胞内Aβ检测仍具挑战。作者此前开发了C99 720-670 FRET生物传感器用于记录γ-分泌酶活性，并建立了多重免疫染色平台，可在亚细胞分辨率下选择性检测胞内Aβ。利用这些方法，作者发现C99主要在晚期内体...
基因编码荧光生物传感器是追踪完整生物系统内化学过程的重要工具，但候选传感器的开发与优化仍受限于筛选方法的技术瓶颈。本文提出一种结合液滴微流控与自动荧光成像的高通量多参数筛选平台，可将筛选通量提高约一个数量级，并能够同时评估对比度、亲和力和特异性等多个性能指标，而非仅筛选单一特征。作者利用凝胶壳珠作为微透析室，在单个微囊中表达并检测数...
过去十年，免疫治疗为多种癌症带来新疗法，但肺癌仍是癌症死亡首位原因。携带EGFR突变的非小细胞肺癌患者因毒性问题难以从免疫检查点抑制剂中获益，主要依赖姑息化疗和第三代酪氨酸激酶抑制剂奥希替尼。奥希替尼较第二代TKI延长生存期约9个月，但肿瘤仍会因耐药机制和缺乏抗肿瘤免疫应答而复发。本研究探索奥希替尼联合抗HER3单克隆抗体治疗，发现...
自标记蛋白标签（如 HaloTag）可将融合蛋白与合成荧光素共价结合，用于荧光显微镜成像。本文报道了 HaloTag7 的工程化变体，使其在与罗丹明类荧光素结合后表现出比 HaloTag7 更高或更低的亮度和荧光寿命。作者通过定点饱和突变筛选 HaloTag 结合位点，获得更亮的 HaloTag9 以及更暗的 HaloTag10 和...