G蛋白偶联受体（GPCR）寡聚化可调节受体功能。作者此前发现血清素受体7（5-HT7R）与细胞黏附分子CD44相互作用，但其功能后果不明。本研究用定量FRET（lux-FRET）测定5-HT7R与CD44同源及异源复合物形成亲和力，并用cAMP响应荧光素酶和FRET型cAMP生物传感器评估异源寡聚化对5-HT7R介导cAMP信号的影...
近期增强 cGMP 信号治疗心血管疾病的临床试验重新引发对肾脏 cGMP 生物学的关注，但其在肾小球内皮细胞（GECs）和足细胞中的作用仍不清楚。本研究利用在 GECs 或足细胞中表达 FRET 型 cGMP 生物传感器 cGi500 的小鼠急性肾切片，实现细胞内 cGMP 的实时可视化。给予心房利钠肽（ANP）或一氧化氮供体 SN...
多巴胺向纹状体神经元传递信息，神经传递紊乱会导致运动障碍中的运动缺陷。纹状体多巴胺信号下游汇聚到腺苷酸环化酶5（AC5）介导的环磷酸腺苷（cAMP）合成，表明信号转导在运动生理中至关重要。然而，多巴胺解码与 AC5 调控之间的关系尚不清楚。本研究采用无偏全局蛋白稳定性筛选，鉴定出钾通道四聚化结构域蛋白1（KCTD1）是 AC5 蛋白...
Förster 共振能量转移（FRET）在荧光蛋白生物传感器中广泛用于监测活细胞内生化活动的动态变化。FRET 比值（受体与供体信号之比）常作为 FRET 效率的替代指标，但需借助仅含供体或仅含受体的样品校正信号串扰，且对激光强度、检测器增益等成像条件高度敏感，导致不同实验或时间点之间难以直接比较。受多重生物传感器条形码成像方法启发...
荧光共振能量转移（FRET）生物传感器是细胞生物学和G蛋白信号研究的重要工具。荧光寿命成像显微镜（FLIM）可避免荧光强度法的许多缺点，并能定量测量生物传感器的激活状态或FRET状态。然而，目前仍缺乏可靠的FLIM-FRET生物传感器，且已有数据处理与分析流程存在可重复性挑战。本研究在原代小鼠胰腺导管腺癌（PDAC）活细胞中建立了一...
细胞内可交换锌离子池并非静态，既会响应外界扰动，也会随细胞周期自然波动。本文提供一套基于荧光共振能量转移（FRET）生物传感器进行长时程活细胞成像的实验方案，用于监测表达胞质锌传感器 NES-ZapCV2 的 MCF10a 细胞中游离/不稳定锌（labile Zn2+）的动态变化。方案包括细胞培养与维持、Zn2+ 控制最低培养基（M...
近期GWAS将EGFR鉴定为晚发性阿尔茨海默病新风险基因。SHIP2由INPPL1编码，参与EGFR等受体信号网络，且INPPL1表达与认知下降相关，但其在AD进展中的改变未知。本研究显示AD脑EGFR和INPPL1基因表达上调；SHIP2免疫反应主要位于斑块相关星形胶质细胞和营养不良神经突，其增加与人和5xFAD小鼠脑淀粉样蛋白负...
细胞钙稳态是多种生理过程的基础，但细胞内钙分布不均。哮喘发作时，上皮和炎症细胞分泌血小板衍生生长因子（PDGF），诱导气道平滑肌（ASM）细胞增殖迁移，导致气道狭窄。本研究构建亚细胞靶向 FRET 生物传感器，研究 ASM 细胞不同区室的钙调控。PDGF 诱导的细胞质钙（[Ca2+]C）升高源于细胞外钙内流和内质网（ER）钙（[Ca...
TAR DNA结合蛋白43（TDP-43）是一种RNA结合蛋白，在部分神经退行性疾病的中枢神经系统中以聚集形式积累。TDP-43聚集也是包涵体肌病（IBM）等退行性肌病敏感且特异性的病理特征。来自肌萎缩侧索硬化（ALS）和额颞叶痴呆（FTD）脑裂解液的TDP-43聚集物可在体内外作为自模板化聚集种子，支持类朊毒体样细胞间传播。IBM...
γ-secretase 在中枢神经系统中发挥关键作用。我们近期开发的遗传编码 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器，已能在培养活神经元中逐细胞记录 γ-secretase 活性，但其在体内的调控机制仍不清楚。本研究采用近红外（NIR）C99 720-670 生物传感器和 NIR 共聚焦显微镜，在活体小鼠脑内定量记录单个...
酿酒酵母会根据营养可用性调整代谢，通常从葡萄糖发酵转向乙醇呼吸。现有对代谢调控的理解多基于群体平均，而营养转变可能引起单细胞异质响应。本文提出 iCRAFT 方法，将基于 ATP 的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器 yAT1.03 与呼吸抑制剂 Antimycin A 联用，以在单个酵母细胞中区分发酵代谢与呼吸代...
为阐明肥胖和2型糖尿病所致保留射血分数心力衰竭（HFpEF）的机制，作者构建在leprdb背景上稳定表达Epac1-PLN Förster共振能量转移（FRET）生物传感器的小鼠模型。db/db小鼠出现肥胖、2型糖尿病及HFpEF表型，表现为轻度左室肥厚、左房充盈压升高和舒张功能受损。活细胞成像显示，与健康db/+心肌细胞相比，db...
最常见的神经退行性蛋白病包括脑内错误折叠 tau 或 α-突触核蛋白沉积。外周神经系统（PNS）中病理蛋白聚集在 α-突触核蛋白病中已被广泛认可，并作为诊断生物标志物受到关注，但在 tau 病中观察较少。为表征 PNS 在 tau 病中的参与，作者对 54 例尸检 tau 病病例（进行性核上性麻痹 PSP 15 例、阿尔茨海默病 A...