Endogenous γ-Secretase Is Linked to Phagocytic Activity in Microglial Cells.
γ-secretase 以往主要在神经元中研究，但越来越多证据表明其在小胶质细胞中具有重要作用。既往研究显示，药理学抑制 γ-secretase 会损害小胶质细胞的吞噬活性。本研究采用遗传编码的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器，记录内源 γ-secretase 活性，以判断天然存在的细胞间 γ-secretase...
Integrin-mediated Signaling via Paxillin-GIT1-PIX Promotes Localized Rac Activation at the Leading Edge and Cell Migration.
在迁移细胞中，Rac 的激活受胞内信号通路在时间和空间上的精确调控，以保证在前缘形成特定细胞突起——板状伪足。整合素介导的黏附也调控细胞内局部 Rac 激活的信号通路，但相关研究很少。本研究通过靶向 paxillin 的 shRNA 降低 paxillin 表达，探讨整合素介导信号如何影响局部 Rac 激活。结果显示，降低 paxi...
Software for lattice light-sheet imaging of FRET biosensors, illustrated with a new Rap1 biosensor.
光片显微镜（LLSM）因降低光漂白并具备出色的三维时空分辨率而具有重要价值。利用 LLSM 对活细胞中的生物传感器成像，可前所未有地可视化蛋白质构象或翻译后修饰的快速局部变化。然而，LLSM 生物传感器成像所需的计算处理对许多软件包具有挑战性：即使简单旋转细胞渲染或测试用户可选参数，也需要处理大量数据；光片成像在阈值分割和比值成像方...
Sensitive FRET Biosensor Reveals Fyn Kinase Regulation by Submembrane Localization.
Fyn 激酶在血液系统和 T 细胞信号转导中发挥关键作用，但目前缺乏在活细胞中直接可视化其动态活性的工具。本研究开发并表征了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的高灵敏 Fyn 激酶生物传感器，用于在活细胞中监测 Fyn 活性。结果显示，配体结合可在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）和 T 细胞中诱导 Fyn 激酶活性。进一步引入两种不同...
Novel FRET-Based Src Biosensor Reveals Mechanisms of Src Activation and Its Dynamics in Focal Adhesions.
Src 激酶在细胞迁移、机械感知、促分裂与抗凋亡信号中发挥关键作用，其异常激活常见于多种肿瘤。非活性 Src 呈紧凑构象，由 SH2 域结合磷酸化 Tyr527、SH3 域结合 CD linker 及激酶域等分子内相互作用维持；活性 Src 呈开放构象。作者利用这一空间调控机制，构建了基因编码的荧光共振能量转移（FRET）Src 生...
Intravital Imaging to Monitor Therapeutic Response in Moving Hypoxic Regions Resistant to PI3K Pathway Targeting in Pancreatic Cancer.
先进活体成像技术可实现治疗抑制下信号通路活性的动态监测。本研究评估了胰腺导管腺癌（PDAC）缺氧微环境中 PI3K 通路靶向治疗的耐药性，发现三种临床相关抑制剂均存在显著的缺氧诱导耐药。为应对这一临床问题，作者通过免疫荧光和氧敏感纳米颗粒磷光寿命成像绘制肿瘤缺氧分布，并证明这些缺氧区域会在肿瘤内瞬态移动。为将微环境信息与药物反应叠加...
Resistance to inhibitors of cholinesterase (Ric)-8A and Gαi contribute to cytokinesis abscission by controlling vacuolar protein-sorting (Vps)34 activity.
胆碱酯酶抑制剂抗性蛋白（Ric）-8A 是 Gαi、Gαq 和 Gα12/13 的鸟苷酸交换因子，参与细胞信号转导，并作为分子伴侣介导新生 Gα 亚基与细胞膜的初始结合。Ric-8A、Gαi 亚基及其调控蛋白在胞质分裂末期前定位于中体，并与细胞分裂最后阶段相关。本研究鉴定了 Ric-8A 通过调控 Vps34 活性影响胞质分裂与断离...
A versatile toolkit to produce sensitive FRET biosensors to visualize signaling in time and space.
基于荧光共振能量转移（FRET）的基因编码比率型生物传感器是研究细胞信号时空动态的有力工具，但许多传感器灵敏度不足。本文报道了一个生物传感器库，其中供体和受体荧光蛋白均包含循环置换突变体，改变偶极取向，从而在保持 FRET 效率的同时更好地适应不同信号分子施加的结构约束。该策略提高了已有 RhoA 和细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）...
Sds22 and Repo-Man stabilize chromosome segregation by counteracting Aurora B on anaphase kinetochores.
在有丝分裂纺锤体组装过程中，Aurora B 激酶参与纠错机制，使承受较低机械张力的动粒-微管连接解离。然而进入后期后，姐妹染色单体凝聚蛋白被移除导致张力下降，动粒-微管连接仍须维持。与此一致，Aurora B 在中期-后期转换时从染色体重新定位到中央纺锤体。本研究利用磷酸化 FRET 生物传感器进行 RNA 干扰筛选，鉴定出两个 ...
Spatiotemporal activation of Rac1 for engulfment of apoptotic cells.
吞噬凋亡细胞需要吞噬细胞协调激活调控肌动蛋白动力学的 Rho 家族 GTP 酶。本研究利用 FRET 生物传感器实时可视化吞噬凋亡细胞过程中 Rac1 的时空激活。结果显示，凋亡细胞通常被吞噬细胞的片足吞噬，而片足区域 Rac1 处于激活状态；同一片足部位常连续吞噬多个凋亡细胞，提示存在凋亡细胞进入的门户。在该位置，激活的 Rac1...