天然和合成类固醇激素广泛存在于环境中，即使低浓度也具有内分泌活性并危害健康。为检测环境类固醇激素，本文基于生物层干涉（BLI）原理开发了一种新型生物传感器系统。检测基于结合生物分子的光纤表面反射白光干涉图案变化，无需放射性、酶或荧光标记。将来自 Comamonas testosteroni 染色体DNA的两段含10 bp回文序列的双...
无标记光学生物传感器是药物发现中表征生物分子相互作用的有力工具。本研究描述了实验室常用四种生物传感器平台，用于评估十种高亲和力抗人前蛋白转化酶枯草溶菌素9型（PCSK9）单克隆抗体（mAb）的结合亲和力与动力学。Biacore T100 和 ProteOn XPR36 均基于表面等离子共振（SPR）技术，前者采用四个串联流路，后者通...
当前工业药物发现通常以候选药物库对靶标分子进行经验性筛选。相比平衡法，高通量动力学测量能够分别获得结合亲和力的各动力学组分。尽管仪器硬件提升了通量，数据处理仍存在三个瓶颈：现有商业分析模型未考虑导致体外生物物理质量差的分子固有性质；通过用户界面处理数据耗时且不利于并行采集；尚无商业方案能在动力学竞争分析中纳入历史动力学数据。本文提出...
非流动生物层干涉（BLI）已成为无标记、实时、高通量监测几乎所有生物分子相互作用的常用工具。需要测量脂质体与多种化合物相互作用动力学的高效筛选方法要求固定化脂质体。本文描述了一种用于相互作用研究的脂质体固定化方法，基于该生物传感器平台的生物物理原理。固定化方法包括装载含DSPE-PEG(2000)-生物素的空间稳定胶束（SSMs），...
流感血凝素抑制（HI）和病毒微量中和（MN）试验广泛用于血清流行病学研究，但现场便携性有限且难以完全自动化高通量检测。为此，作者利用重组血凝素（rHA）抗原，结合Chembio、Luminex和ForteBio三种平台，建立了三种流感亚型特异性抗体多重检测方法，并用一组特征明确的人血清评价其灵敏度、特异性和亚型交叉反应性。与传统HI...
本研究将生物层干涉（BLI）技术与酶联适配体竞争结合法相结合，建立了一种实时、超灵敏、快速定量检测海洋生物毒素河鲀毒素（palytoxin, PTX）的方法。以辣根过氧化物酶（HRP）标记的DNA适配体作为生物识别受体，与固定在传感器表面的PTX进行竞争性结合；随后将形成的PTX-HRP-适配体复合物浸入3,3'-二氨基联苯胺（DA...
生物层干涉（BLI）是一种成熟的光学无标记技术，用于研究生物分子相互作用。本文首次报道基于细胞的BLI（cBLI）应用，可在无标记条件下实时监测活细胞内的信号转导。将人A431上皮样癌细胞捕获到胶原包被的生物传感器上并进行血清饥饿处理，随后暴露于靶向不同受体的激动性化合物，同时记录cBLI信号。表皮生长因子（EGF）刺激表皮生长因子...
通过外源配体结合稳定亚稳态或易聚集蛋白的折叠态，是降低蛋白折叠缺陷所致疾病病理的有吸引力策略。现有方法受蛋白聚集干扰而受限。本文报道一种基于 GroEL 分子伴侣的生物层干涉（BLI）变性剂脉冲平台，用于快速评估折叠蛋白的动力学稳定性并监测配体稳定效应，适用于内源稳定蛋白（单体、寡聚体、多结构域蛋白）和亚稳态蛋白（如低 Tm）。将目...
蛋白质折叠长期依赖溶液法，如溶解度、酶活、二级结构、FRET、NMR 和氢氘交换等，但快速分析常受聚集副反应影响。本文建立一种生物层干涉（BLI）分子伴侣检测系统，用于筛选变性蛋白的优良复性条件。通过监测无核苷酸高亲和 GroEL 与固定蛋白的结合，可实时反映固定蛋白随时间的折叠程度。GroEL 优先结合暴露疏水面的未折叠或部分折叠...
铵通过谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸合酶（GOGAT）的连续作用进入碳骨架。蓝细菌 Synechocystis sp. PCC 6803 的 GS I 活性受两个内在无序失活因子（IF）调控：65 残基 IF7 和 149 残基 IF17。本研究利用核磁共振（NMR）研究 IF7 与 IF17 的构象，并用 NMR 和生物层干涉（B...
生物层干涉（BLI）是一种利用光纤生物传感器对蛋白相互作用进行无标记实时监测的光学技术。本研究将Octet Red BLI系统的自动化、无微流控和在线监测优势与信号增强步骤相结合，建立了一种快速、高灵敏的免疫学检测方法，用于生物战剂检测。作为概念验证，作者选择两类生物威胁对象：蛋白毒素蓖麻毒素（ricin）和革兰阴性菌土拉弗朗西斯菌...
实时无标记抗体筛选系统因抗体发现平台产生大量纯化抗体和上清样品而日益重要，但生物传感器类型会显著影响动力学和表位分箱结果。本研究评估了ForteBio人源特异性Protein A（ProA）、抗人IgG定量（AHQ）、抗人Fc捕获（AHC）以及定制生物素化抗人Fc捕获（b-AHFc）传感器在纯化IgG和IgG上清中的装载能力、再生性...
细菌毒素或病毒进入细胞常需细胞表面结合与内吞，内体酸化诱导可溶性毒素有限展开/重折叠并插入膜。作者提出，通过理性固定可溶性毒素，使膜插入前的展开-重折叠转变朝向远离固定表面的方向进行，可在脂质胶束/前纳米盘存在下观察毒素膜插入复合物。以炭疽毒素保护抗原（PA）为例，将固定化的前孔形式在模型脂质膜（纳米盘）中转变、插入，并以膜溶解形式...
本文报道了一种基于分子伴侣GroEL的生物层干涉（BLI）检测方法，用于识别药理学相关蛋白的结构改变和/或聚集物种。研究首先优化了生物素化GroEL在链霉亲和素BLI传感器上的固定，并通过圆二色、ANS荧光、浊度和GFP重折叠实验证明天然与生物素化GroEL均保持稳定的结构和活性。以酸性成纤维细胞生长因子-1（FGF-1）为例，40...
针对特定抗原的抗体panel多样性可通过多种检测格式建立。传统表位分箱实验将纯化抗体两两检测：若两种抗体竞争结合同一抗原，则归入同一簇或箱；若不竞争，则归入不同簇。本文报道一种高通量检测，可直接对粗杂交瘤上清进行分组，无需抗体纯化；同时无需重组蛋白，因为检测在表达目标抗原的细胞上进行，因此可用于难以纯化的细胞表面蛋白。重链可变区（V...
基孔肯雅病毒（CHIKV）是蚊媒甲病毒，近期再流行并造成最多约650万例急性和慢性风湿病，目前尚无获批疫苗，抗炎治疗常不充分。作者从 CHIKV 感染后恢复者中分离并表征了两个人源单克隆抗体 C9 和 E8。C9 被确定为强效病毒中和抗体，生物传感器结合研究证明其可识别完整 CHIKV 病毒样颗粒（VLP）上的残基。对 CHIKV ...
炭疽保护性抗原（PA）前孔七聚体的第2结构域在内体酸化过程中发生展开与再折叠，形成可插入内体膜的约100 Å β桶状孔，并促进致死因子（LF）和/或水肿因子（EF）从内体向细胞质转位。作者构建了PA前孔与LF结合域LFN的固定化复合物，利用表面等离子共振（SPR）和生物层干涉（BLI）实时监测前孔向孔转变的动力学。当溶液pH从7.5...
食品安全要求快速筛查低分子化学污染物，如生物毒素、药物残留和农药。现有食品污染物生物传感器多基于电化学、荧光或表面等离子共振，而生物层干涉（BLI）已在药物发现和生命科学中应用，正逐步用于食品污染物分析。本研究以膝痛酸（domoic acid, DA）为模型化合物，评估 BLI 生物传感器用于低分子食品污染物检测的可行性。通过同时建...
近年来，生物传感器技术在生物分子相互作用研究中取得显著进展。生物层干涉（BLI）是由ForteBio开发的一种有前景的生物传感器平台，主要用于在科研和常规应用中定性及定量蛋白/蛋白相互作用。本文描述了一种基于该平台生物物理原理表征蛋白/脂质体结合相互作用的方法。研究采用三种不同脂质体配方和蛋白激素重组人促红细胞生成素（rh-Epo）...
为实现血糖连续监测，作者开发了一种植入式无标记光学传感器：将光纤探针置于注射器针头内部空腔中，并在探针尖端固定葡萄糖结合蛋白刀豆蛋白A（Concanavalin A, Con A）；针内加载化学偶联甘露糖的牛血清白蛋白（BSA-mannose）溶液，并用半透膜封闭。当传感器浸入葡萄糖样品时，葡萄糖小分子可自由透过半透膜，与针腔内的 ...