Competitive Epitope Binning Using HT-SPR.
本文介绍基于高通量表面等离子共振（HT-SPR）的竞争表位分箱方法，用于系统解析多达数百个单克隆抗体（mAbs）的竞争表位谱。该方法在 Carterra LSA/LSAXT 仪器上，将纯化 mAb 通过 EDC/sulfo-NHS 胺基偶联固定于 HC30M 生物传感器芯片，形成 mAb 阵列；随后依次注入可溶性抗原（Ag）和溶液相...
Kinetic Analysis and Epitope Binning Using Surface Plasmon Resonance.
定量分子结合亲和力是药物研发和生命科学研究的重要组成。本章概述表面等离子共振（SPR）光谱法监测蛋白-蛋白相互作用的实用方法，重点介绍基本实验设计，包括配体固定、分析物注射、表面再生和数据评价，并简要总结 SPR 表位分箱实验。SPR 生物传感器可无标记实时监测分子相互作用：一个结合伙伴作为配体固定在传感芯片表面，另一个作为分析物通...
Broad epitope coverage of a human in vitro antibody library.
成功发现治疗性抗体依赖于识别能靶向抗原多种分子表位的高亲和力结合分子。能够产生广泛“表位覆盖”的抗体筛选项目可提高获得具有所需生物学功能候选分子的概率。因此，在早期发现阶段常采用表位分箱实验，将抗体按表位家族或“箱”分类，并优先选择进一步表征和优化的先导分子。本文描述的合作项目以鸡卵白溶菌酶（HEL）为模型抗原，结合三项关键能力：1...
The emerging role of biosensor-based epitope binning and mapping in antibody-based drug discovery.
表面等离子共振（SPR）长期用于药物候选分子的亲和力与动力学表征。随着治疗性单克隆抗体（mAbs）药物类别增长以及高通量无标记生物传感器出现，其应用已从单纯结合测量扩展到早期药物发现中的表位表征，包括 mAb 的表位分箱与映射。本文综述了表位表征在抗体药物发现早期的重要性，并提出成功发现先导化合物的策略：在克隆预筛选后对 mAbs ...
Understanding ForteBio's Sensors for High-Throughput Kinetic and Epitope Screening for Purified Antibodies and Yeast Culture Supernatant.
实时无标记抗体筛选系统因抗体发现平台产生大量纯化抗体和上清样品而日益重要，但生物传感器类型会显著影响动力学和表位分箱结果。本研究评估了ForteBio人源特异性Protein A（ProA）、抗人IgG定量（AHQ）、抗人Fc捕获（AHC）以及定制生物素化抗人Fc捕获（b-AHFc）传感器在纯化IgG和IgG上清中的装载能力、再生性...
Monoclonal antibody binding-site diversity assessment with a cell-based clustering assay.
针对特定抗原的抗体panel多样性可通过多种检测格式建立。传统表位分箱实验将纯化抗体两两检测：若两种抗体竞争结合同一抗原，则归入同一簇或箱；若不竞争，则归入不同簇。本文报道一种高通量检测，可直接对粗杂交瘤上清进行分组，无需抗体纯化；同时无需重组蛋白，因为检测在表达目标抗原的细胞上进行，因此可用于难以纯化的细胞表面蛋白。重链可变区（V...
Selection and maturation of antibodies by phage display through fusion to pIX.
过去二十年间，M13噬菌体展示用于抗体发现与优化已显著发展。抗体展示与筛选方法包括直接展示于pIII，或通过二硫键及卷曲螺旋适配蛋白间接展示。本文描述将Fab库展示于病毒颗粒另一端较小的pIX蛋白，并将其应用于从天然库中发现新型抗体。基于pIX介导展示的抗体筛选结果与其他体外方法相当，并可通过抗原结合噬菌体直接感染大肠杆菌高效回收，...
Expanding the ProteOn XPR36 biosensor into a 36-ligand array expedites protein interaction analysis.
本文展示了提高 ProteOn XPR36 生物传感器通量的方法，使其能够同时表征多种多路复用格式，例如 36 个靶向同一抗原的不同单克隆抗体，并支持详细的表位分箱与表位映射研究。采用这些方法测得的动力学速率常数与 Biacore 2000 的结果高度相关；ProteOn 藻酸盐基 GLC 芯片获得的绝对参数值与 Biacore 平...
Exploring blocking assays using Octet, ProteOn, and Biacore biosensors.
本文展示了无标记实时光学生物传感器在竞争性结合实验中的应用，通过对抗体面板进行表位分箱。作者描述了三种实验取向，即串联阻断、预混阻断和经典夹心阻断，并分别在ForteBio Octet QK、Bio-Rad ProteOn XPR36和GE Healthcare Biacore 3000三个平台上完成。通过成对检测抗体是否相互阻断对...