人肾小管上皮细胞被认为是志贺毒素（Stx）介导的溶血性尿毒症综合征（HUS）发病机制中的靶细胞，HUS由产Stx肠出血性大肠杆菌（EHEC）引起。对原代人肾近端小管上皮细胞（pHRPTEpiCs）中Stx结合糖鞘脂（GSL）的分析显示，主要受体为三己糖神经酰胺（Gb3Cer）和四己糖神经酰胺（Gb4Cer），优势脂形式为Cer(d1...
肠出血性大肠杆菌（EHEC）感染可致志贺毒素（Stx）进入循环，引起肠外并发症；Stx 损伤脑微血管可致严重脑功能障碍，是重症 EHEC 感染急性死亡最常见原因。Stx2a 与重症相关，Stx2e 与轻症相关。Stx2a 优先结合糖鞘脂 Gb3Cer，Stx2e 优先结合 Gb4Cer。本研究在原代人脑微血管内皮细胞（pHBMECs...
EphA4 受体酪氨酸激酶在发育、癌症进展和神经疾病中发挥关键作用，但其激酶活性在时间和空间上的调控机制仍不清楚。为可视化细胞质膜不同微区中的 EphA4 活性，作者开发了一种基于 Förster 共振能量转移（FRET）的高灵敏 EphA4 生物传感器，并通过脂质修饰将其靶向至脂筏样微区内部或外部。结果表明，该传感器在体外和活细胞...
Rho GDP解离抑制因子α（RhoGDIα）是Rho家族GTP酶的重要负调控因子，通过关闭GDP/GTP循环和细胞质/膜转位来调控细胞迁移。然而，目前尚缺乏直接研究层流剪切应力如何激活RhoGDIα–Rho GTPase复合物的工具。本研究基于荧光共振能量转移（FRET）技术构建了一种新型生物传感器sl-RhoGDIα，用于在活H...
血小板衍生生长因子受体（PDGFR）感知胞外生长因子并将信号转入细胞内，调控细胞增殖、迁移和存活。关于 PDGFR 位于哪些膜微区以及如何在不同微区调控多种胞内信号通路，仍存在争议。本研究开发了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的新型 PDGFR 生物传感器，可在活细胞中以高时空分辨率实时检测 PDGFR 活性。为研究膜微区中的亚...
胆固醇是真核细胞膜的关键结构成分。质膜外叶的胆固醇被认为与鞘脂及特定蛋白形成膜纳米结构域，内体等细胞内膜中的胆固醇也参与膜转运。细胞胆固醇稳态和从头合成调控依赖囊泡与非囊泡转运途径，因此可视化并检测细胞内胆固醇，尤其是质膜胆固醇，对理解胆固醇相关复杂生物学过程至关重要。产气荚膜梭菌O毒素（perfringolysin O, PFO）...
将 cAMP 生成限制在特定亚细胞位置可选择性调控功能反应，但 cAMP 信号如何被限制仍不清楚。负责 cAMP 生成的不同受体和腺苷酸环化酶亚型在质膜脂筏与非脂筏区室中分布不均。本研究在 HEK293 细胞中考察膜微区对 cAMP 反应的组织作用。使用自由扩散的 FRET 型生物传感器 Epac2-camps 测量全局 cAMP ...
Src 是非受体酪氨酸激酶，参与细胞迁移、增殖和存活等过程，其活性受亚细胞定位精细调控。质膜并非均一，富含胆固醇、鞘磷脂和饱和脂肪酸的脂筏可作为信号平台，但 Src 在脂筏与非脂筏区室的调控机制仍不清楚，且传统去垢剂提取脂筏存在争议。为在活细胞中实时可视化局部 Src 活性，作者将基于 FRET 的 Src 生物传感器与膜靶向标签偶...
基于荧光共振能量转移（FRET）的遗传编码生物传感器已被广泛用于以高时空分辨率可视化活细胞中的分子活性，但生物传感器蛋白的快速扩散会阻碍真实分子激活图的精确重建。作者基于荧光漂白后恢复（FRAP）实验，发展了一种有限元（FE）方法，用于分析、模拟并扣除可移动生物传感器的扩散效应。该方法被应用于分析定位于不同亚细胞区室的 Src FR...