青色荧光蛋白（CFP）常作为遗传编码生物传感器中的FRET供体用于活细胞成像。近期通过大规模随机突变获得了量子产率显著提高的CFP变体。本文表明，仅在ECFP中引入T65S和H148G两个突变，即可使其性能接近最优CFP，得到Aquamarine（QY=0.89，平均荧光寿命tf=4.12 ns）。Aquamarine具有优异的pH...
蛋白激酶A（PKA）是细胞信号转导的关键调控酶，可磷酸化多种靶蛋白，并被A-激酶锚定蛋白（AKAP）家族在空间上锚定。AKAR2是一种活细胞FRET生物传感器，当被PKA磷酸化时产生荧光共振能量转移信号。AKAP5是AKAP家族重要成员，可锚定PKA、磷酸二酯酶PDE4D及G蛋白偶联受体（GPCR），并介导GPCR向ERK1/2的M...
本研究在啮齿动物脑切片中结合电生理记录与新型荧光生物传感器成像，实时监测单个神经元内蛋白激酶A（PKA）的激活。电生理以慢后超极化钾电流（I_sAHP）作为膜水平PKA磷酸化事件的指标；生物传感器包括基于Epac的cAMP探针（Epac1-camps、Epac2-camps300）和基于AKAR的PKA活性探针（AKAR2.2、AK...
上皮性卵巢癌（EOC）是致死率最高的妇科恶性肿瘤，部分原因是其临床隐匿性转移。理解 EOC 扩散和侵袭机制可能提供抗转移治疗新靶点或转移病检测新方法。cAMP 依赖性蛋白激酶（PKA）在 EOC 中常失调，且 PKA 活性和通过 A 激酶锚定蛋白（AKAPs）的亚细胞定位是细胞骨架动力学和细胞迁移的重要调节因子。因此，我们研究 PK...
第二信使cAMP依赖性蛋白激酶A（PKA）在多种细胞和生理反应中发挥重要作用。在心肌细胞肌浆网（SR）上，PKA调控兴奋–收缩耦联中的钙循环，其功能异常与心力衰竭等多种心脏病相关。本研究开发了一种新型基于荧光共振能量转移（FRET）的A激酶活性生物传感器SR-AKAR3，用于直接可视化SR上的PKA动态。肾上腺素能受体激活可诱导SR...
膜筏是富含鞘脂和胆固醇的质膜微区，其中动态排列多种信号蛋白。cAMP/蛋白激酶A（PKA）通路的多个组分，包括β-肾上腺素受体（β-AR）、G蛋白和腺苷酸环化酶（AC），在膜筏与非筏区域呈差异定位。由于PKA参与调控多种基本细胞功能，且许多功能依赖膜筏，理解PKA活性如何被这些质膜微区特异性调节具有重要意义。为此，作者开发了改进的F...