本文报道了一种用于检测蛋白激酶活性的新型电化学发光（ECL）生物传感器，其基于多重信号放大纳米探针。该策略将黄嘌呤氧化酶（XOD）和5′-磷酸端DNA偶联的金纳米粒子（AuNPs）通过Zr4+与磷酸化肽整合。金纳米粒子上负载的XOD可在次黄嘌呤（HA）存在下催化溶解氧生成H2O2，而H2O2作为鲁米诺（luminol）ECL反应的共...
监测蛋白激酶活性和筛选抑制剂对激酶相关药物发现、疾病早期诊断及疗效评价具有重要意义。本文开发了一种基于羧肽酶Y（CPY）消化触发信号放大的简单电化学方法，用于检测酪蛋白激酶II（CK2）活性。在该策略中，CK2催化底物肽发生磷酸化，磷酸化位点保护底物肽免受CPY从C端水解，使电极表面保留带负电的肽片段，从而维持对氧化还原探针Fe(C...
细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）在细胞周期进程和转录调控中起关键作用，其过度激活与癌症相关。然而，在生理背景下连续、敏感地测量其活性或药物抑制的方法有限。为此，作者设计了一种模块化荧光蛋白生物传感器CDKACT，通过CDK/周期蛋白磷酸化引起荧光强度实时变化来报告激酶活性。该传感器由组蛋白H1来源的CDK底物肽序列（引入唯一半胱氨...
蛋白激酶是调控几乎所有生物过程的关键酶类，其结构折叠相似，但作用机制、调控方式、底物特异性和亚细胞定位差异显著。传统放射性终点检测无法在天然环境中实时表征其动态活性。荧光生物传感器的发展为在活细胞中实时、高时空分辨率地研究蛋白激酶行为与调控提供了新途径。目前已发展两大类传感器：一类是遗传编码的单链荧光共振能量转移（FRET）生物传感...
蛋白激酶（包括蛋白激酶A，PKA）参与众多关键细胞信号通路，但目前在遗传指定细胞群体中实时、高空间分辨率地监测激酶活性仍是未满足需求，对理解复杂生物系统及新药筛选至关重要。作者基于蛋白激酶天然识别序列可通过化学交换饱和转移磁共振成像（CEST-MRI）检测的假设，设计了一种基因编码生物传感器，其由PKA天然底物肽LRRASLG的八个...
在有丝分裂纺锤体组装过程中，Aurora B 激酶参与纠错机制，使承受较低机械张力的动粒-微管连接解离。然而进入后期后，姐妹染色单体凝聚蛋白被移除导致张力下降，动粒-微管连接仍须维持。与此一致，Aurora B 在中期-后期转换时从染色体重新定位到中央纺锤体。本研究利用磷酸化 FRET 生物传感器进行 RNA 干扰筛选，鉴定出两个 ...
遗传编码的Förster共振能量转移（FRET）传感器是现代细胞生物学的重要工具，其构象变化会改变供体-受体发射比，从而在时间和空间上监测靶分子变化及酶活性。FRET传感器广泛用于追踪磷酸化事件和钙离子升高。本文首次将体外与细胞内FRET测量和小角X射线散射（SAXS）相结合，在低分辨率水平上分析传感器功能相关的构象变化。研究系统表...
本文报道一种基于TiO2辅助银纳米颗粒增强的电化学生物传感器，用于蛋白激酶活性及其抑制的灵敏检测。以蛋白激酶A（PKA）为模型酶，Kemptide为底物肽，通过巯基乙酸（MAA）和EDC-NHS化学将其固定于金电极表面。PKA在ATP存在下催化Kemptide磷酸化，生成的磷酸基团与TiO2纳米颗粒特异性结合，实现磷酸化产物的富集与...
本文报道一种用于电化学测定蛋白激酶活性的多用途肽基生物传感器。该传感器以氧化还原活性辅底物腺苷5′-[γ-二茂铁]三磷酸（Fc-ATP）为核心，使激酶催化将γ-磷酸-二茂铁转移到羟基氨基酸上，从而通过电化学检测磷酸化事件。作者将该方法用于监测丝氨酸/苏氨酸激酶CK2以及酪氨酸激酶Abl1-T315I和HER2在缓冲液和细胞裂解液中的...