Development of the Sensing Platform for Protein Tyrosine Kinase Activity.
本研究开发了一种基于酪氨酸酶的微型电化学传感平台，用于无标记检测蛋白酪氨酸激酶活性。该平台可在低样品体积（1–2 µL）下检测酪氨酸激酶底物肽，如 c-Src、Hck 和 Her2。重复测量重现性高，相对标准偏差（RSD）为 6.6%。对 Hck 和 Her2 的检测线性范围为 1–200 U/mL，检出限为 1 U/mL。该平台还...
Fluorescent Biosensor of CDK5 Kinase Activity in Glioblastoma Cell Extracts and Living Cells.
CDK5在神经功能中起重要作用，并在神经退行性疾病以及胶质母细胞瘤和神经母细胞瘤中过度激活。尽管该激酶是公认的生物标志物和药物靶点，但目前缺乏在细胞裂解液或活细胞中探测其活性的手段。为此，作者基于CDK5特异性底物文库设计了一种CDK5激酶活性荧光肽报告分子，并证实其对重组CDK5/p25具有响应能力；在胶质母细胞瘤细胞裂解液中，该...
Identification of a New Inhibitor That Stabilizes Interleukin-2-Inducible T-Cell Kinase in Its Inactive Conformation.
白细胞介素-2诱导性T细胞激酶（ITK）在T细胞信号转导中发挥重要作用，是潜在药物靶点。由于蛋白激酶ATP结合位点高度保守，设计选择性激酶抑制剂仍具挑战。靶向激酶非活性构象有助于提高抑制剂选择性，因此从初筛命中物中识别能稳定非活性构象的化合物对选择性评估很重要。本研究使用去磷酸化ITK，通过ADP-Glo酶活检测对39万化合物库进行...
A novel photoelectrochemical biosensor for protein kinase activity assay based on phosphorylated graphite-like carbon nitride.
蛋白激酶是细胞信号通路中普遍而关键的调节因子，其活性检测对疾病诊断和药物筛选具有重要意义。本文报道了一种基于磷酸化石墨相碳氮化物（P-g-C3N4）的光电化学生物传感器，用于检测蛋白激酶A（PKA）活性。该策略利用Zr4+与磷酸基团的高亲和配位作用，使P-g-C3N4探针特异性结合到经PKA磷酸化的底物肽上。在可见光照射下，P-g-...
Fluorescent peptide biosensor for monitoring CDK4/cyclin D kinase activity in melanoma cell extracts, mouse xenografts and skin biopsies.
黑色素瘤是最具侵袭性的皮肤癌，p16INK4a-Cyclin D-CDK4/6-pRb通路在约90%的黑色素瘤中失调。CDK4/Cyclin D激酶过度激活可由CDK4突变、Cyclin D扩增或p16INK4a缺失引起，是黑色素瘤的关键生物标志物和新兴药靶，但缺乏直接检测或定量其活性的工具。本文报道一种荧光肽生物传感器CDKACT...
Electrochemiluminescence resonance energy transfer between graphene quantum dots and graphene oxide for sensitive protein kinase activity and inhibitor sensing.
本文首次提出一种基于石墨烯量子点(GQDs)为供体、氧化石墨烯(GO)为受体的电化学发光共振能量转移(ECL-RET)生物传感器，用于监测蛋白激酶活性。以酪蛋白激酶II(CK2)为模型，在CK2和ATP存在下，电极表面肽段被磷酸化；随后抗磷酸丝氨酸抗体偶联GO纳米复合体(Ab-GO)通过抗原-抗体作用捕获于磷酸化肽段/GQDs修饰电...
Multiple signal amplification electrogenerated chemiluminescence biosensors for sensitive protein kinase activity analysis and inhibition.
本文报道了一种用于检测蛋白激酶活性的新型电化学发光（ECL）生物传感器，其基于多重信号放大纳米探针。该策略将黄嘌呤氧化酶（XOD）和5′-磷酸端DNA偶联的金纳米粒子（AuNPs）通过Zr4+与磷酸化肽整合。金纳米粒子上负载的XOD可在次黄嘌呤（HA）存在下催化溶解氧生成H2O2，而H2O2作为鲁米诺（luminol）ECL反应的共...
Fluorescent biosensors for drug discovery new tools for old targets--screening for inhibitors of cyclin-dependent kinases.
细胞周期依赖性激酶（CDK/Cyclin）在细胞周期、转录调控、神经元分化和代谢等过程中起核心作用，并在多种人类癌症中过度激活，是重要抗肿瘤药物靶点。已有大量 ATP 竞争性抑制剂通过天然产物、高通量筛选或结构导向方法获得，但靶向蛋白-蛋白界面或变构位点、捕获非活性构象中间体的策略仍具挑战。荧光生物传感器可灵敏、选择地检测复杂生物样...
The importance of Raf dimerization in cell signaling.
Raf激酶家族是连接膜结合Ras GTP酶与下游MEK/ERK激酶的关键信号中间体。其调控机制复杂，近年研究发现Raf二聚化是Ras依赖性Raf激酶激活以及多种疾病相关突变Raf蛋白致病功能所必需的步骤。野生型B-Raf和C-Raf在生长因子刺激下主要形成异源二聚体，而二聚界面突变可阻断或增强二聚化并改变激酶活性。ATP竞争性Raf...
A high-content biosensor-based screen identifies cell-permeable activators and inhibitors of EGFR function: implications in drug discovery.
激酶抑制剂的成功验证了其作为药物的价值，但发现过程因候选物缺乏细胞活性而失败率高。作者认为在活细胞中筛选可发现具有细胞渗透性的新型调节剂。为此，他们使用近期优化的表皮生长因子受体（EGFR）生物传感器检测法筛选 EGFR 活性调节剂。该检测法在 384 孔高通量筛选（HTS）条件下得到验证，信噪比为 21，Z′ 值为 0.56，表明...
Reusable amperometric biosensor for measuring protein tyrosine kinase activity.
本文报道了一种简单、低成本、可重复且无标记的蛋白酪氨酸激酶活性检测方法，基于酪氨酸酶构建安培生物传感器。该方法利用磷酸化可阻断酪氨酸酶催化氧化肽中酪氨酸或酪氨酸残基的特性：当使用 p60c-src 特异性肽底物 p60c-src substrate I 时，可快速测定 p60c-src 蛋白酪氨酸激酶（Src）的活性。该传感器对 S...
TiO2-assisted silver enhanced biosensor for kinase activity profiling.
本文报道一种基于TiO2辅助银纳米颗粒增强的电化学生物传感器，用于蛋白激酶活性及其抑制的灵敏检测。以蛋白激酶A（PKA）为模型酶，Kemptide为底物肽，通过巯基乙酸（MAA）和EDC-NHS化学将其固定于金电极表面。PKA在ATP存在下催化Kemptide磷酸化，生成的磷酸基团与TiO2纳米颗粒特异性结合，实现磷酸化产物的富集与...