荧光探针是成像与分子生物学研究的重要工具。荧光激活蛋白（FAP）通常基于单链抗体片段（scFv），可激活游离时几乎不荧光的荧光素。本文报道了一类基于设计锚蛋白重复蛋白（DARPin）的新型荧光激活蛋白，称为FADA。作者通过核糖体展示筛选MG结合DARPin，并用酵母表面展示和流式分选对荧光激活能力进行定向成熟，获得FADA-321...
荧光激活蛋白（FAP）是一类新型生物传感器，可特异性结合小分子荧光原，并在结合后使其量子产率从接近0升至约0.5，从而实现高灵敏度荧光检测。与绿色荧光蛋白不同，FAP在未结合荧光原时不发光，因此适合活细胞中受体转运的实时监测。作者将FAP检测平台与高通量流式细胞术结合，对约34万种化合物进行筛选，发现一类能干扰荧光原与FAP结合、从...
本研究将荧光激活蛋白（FAP）技术与高通量流式细胞术（HTFC）相结合，用于在活细胞中实时检测蛋白向质膜转运及从质膜回收的过程。该平台可支持转运受体（如G蛋白偶联受体、受体酪氨酸激酶和离子通道）的药物发现，弥补了传统流式细胞术高通量筛选的不足。作者以β2肾上腺素能受体（β2AR）体系验证方法，并扩展至其他G蛋白偶联受体。对约1200...
荧光激活蛋白（FAPs）是一类新型荧光生物传感器平台，可用于蛋白质发现。现有 FAP 技术通常要求将 FAP 与目标蛋白进行重组融合，分子操作繁琐，限制了其应用与适应性。本文提出一种基于通用亲和试剂的替代策略，用于蛋白质检测。亲和试剂被工程化为双组分融合蛋白：特异性识别部分来源于 IgG 结合蛋白——金黄色葡萄球菌 Protein ...
同时监测活细胞内多种蛋白的转运具有重要价值，因为许多受体蛋白在同一细胞中协同发挥作用，但现有荧光标记技术限制了功能受体对的机制研究。作者将荧光激活蛋白（FAP）技术与高通量流式细胞术结合，发展出一种稳健、灵敏且通用的新型生物传感器，用于在同一细胞中研究多种转运蛋白。该模型系统采用与人β2肾上腺素受体（b2AR）融合的FAP AM2....
本研究探索了一类新型生物传感器的通用价值，该传感器可选择性可视化位于细胞表面的特定膜蛋白分子。该体系利用近期报道的双组分荧光模块，由荧光激活蛋白（FAP）和小分子荧光素组成；荧光素在与 FAP 非共价结合后荧光显著增强。作者构建了表达单跨膜重组膜蛋白的细胞，其质膜外侧展示 FAP，胞内侧展示 EGFP 或 mRFP，并用荧光显微镜观...
配体依赖性受体内化是 G 蛋白偶联受体（GPCR）信号脱敏的重要机制。传统下游报告基因或第二信使检测易受脱靶效应影响，而 GFP 融合蛋白虽可直接标记受体，但单细胞荧光强度不随响应变化，不适合基于信号强度的高通量筛选。本文报道一种基于荧光激活蛋白（FAP）技术的活细胞生物传感器，用于检测人 β2 肾上腺素能受体（b2AR）的内化。作...
单链抗体（scFv）是由免疫球蛋白重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）通过柔性肽链连接子连接而成的工程蛋白。本研究对从酵母表面展示文库中分离的多个 scFv 荧光激活蛋白（FAP）的单个 VH 或 VL 域活性进行了表征，考察其结合环境敏感荧光染料并使其发荧光的能力。结果显示，许多 scFv 需要 VH 和 VL 两个域共同作用才...