本文研究了固定于羧甲基淀粉-接枝聚苯胺/多壁碳纳米管纳米复合材料（CMS-g-PANI@MWCNTs）修饰玻璃碳电极上的酪氨酸酶（Tyrase）的电化学行为。采用傅里叶变换红外光谱（FTIR）、X射线衍射（XRD）和场发射扫描电子显微镜（FESEM）表征纳米复合材料的分子结构与形貌，并通过简单滴涂法将酪氨酸酶固定于修饰电极表面。循环...
3,4-二羟基苯丙氨酸（L-DOPA）中的儿茶酚基团来源于 L-酪氨酸氧化，是多种蛋白生物材料中重要的翻译后修饰，也可作为抗体-药物偶联物等精准蛋白偶联应用的生物正交连接基团。然而，目前引入儿茶酚基团主要依赖对暴露酪氨酸残基的非特异性酶促修饰，或利用酪氨酸营养缺陷型宿主完全替换酪氨酸，这些方法限制了蛋白工程应用。本文报道了一种新的正...
人工酶若能调控其模拟天然体系的酶促活性，将是催化应用中的挑战。本文报道了通过在酶基质中原位生成铜纳米颗粒来构建人工铜金属酶。采用不同酶作为蛋白支架，酶的结构差异尤其影响纳米颗粒尺寸及其周围微环境的控制。结果表明，这些铜纳米酶的氧化酶样催化活性可被用作支架的酶理性调控，其中纳米颗粒尺寸及其微环境起关键作用。因此，这些纳米铜杂化材料能够...
帕金森病以黑质多巴胺能神经元进行性丢失为特征，常用左旋多巴（L-DOPA）治疗，但长期用药可致疗效减退并诱发L-DOPA诱导运动障碍（LID）。GPR88是表达于纹状体中型多棘神经元（MSNs）及皮质纹状体谷氨酸能神经元的孤儿G蛋白偶联受体。本研究利用单侧6-羟基多巴胺（6-OHDA）损伤内侧前脑束的雄性GPR88敲除（KO）小鼠，...
为优化微生物宿主以大规模生产高价值代谢物，常需对宿主基因组进行多轮突变与改造。本文报道了一种基于流式细胞分选（FACS）富集 L-DOPA 酶联生物传感器的三轮筛选策略，用于提高酿酒酵母中 L-DOPA 产量。该方法仅构建一次带条形码的体外转座子介导基因破坏文库，并通过同源重组将同一文库整合到每轮更新后的背景菌株中，从而避免每轮重新...
本研究通过基因融合将来自 Pleurotus ostreatus 的漆酶 POXA1b 与可自组装、具有粘附性的 I 类疏水蛋白 Vmh2 连接，构建漆酶-疏水蛋白嵌合体，并在毕赤酵母中表达、分泌至培养上清。未经进一步纯化的粗上清可直接涂覆聚苯乙烯 96 孔板，实现简单、稳定且低化学消耗的酶固定化。与野生型重组漆酶相比，基因融合提高...
苯基异喹啉生物碱（BIAs）是一类结构复杂的植物次生代谢产物，包括吗啡、可待因等药物。微生物合成有望替代传统植物提取。本文在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中实现了关键中间体(S)-reticuline从葡萄糖的生物合成。为此，作者开发了一种酶联L-DOPA生物传感器：利用植物DOPA二氧合酶（DOD）将...
本研究报道了一种基于微孔板的光学生物传感器，用于同时检测多个样品中的左旋多巴（L-Dopa）水平，且仅需较小反应体积。作者从 Amorphophallus campanulatus 中提取酪氨酸酶，并将其固定在 96 孔聚苯乙烯微孔板孔内表面。比较了直接吸附、吸附后聚乙烯亚胺（PEI）处理和吸附后戊二醛处理三种固定方法，发现戊二醛交...
本文报道了利用伍德沃德试剂K（Woodward's reagent K, WRK）对酪氨酸酶（tyrosinase, Tyr）进行化学修饰并将其共价固定于氧化活化玻璃碳（glassy carbon, GC）电极表面的反应机制。紫外-可见光谱、圆二色光谱和荧光探针实验表明，WRK修饰未引起Tyr二级结构和催化活性的显著变化。固定于氧化...
酚类衍生物在医学、食品和环境样品中的测定对健康监测与污染监控具有重要意义。酪氨酸酶生物传感器因选择性、低成本和快速筛查等优势而受到关注，其中酶的有效固定是关键。本文采用层状自组装（layer-by-layer, LbL）方法，将蘑菇酪氨酸酶（mushroom tyrosinase, MT）与聚阳离子聚二甲基二烯丙基氯化铵（PDDA）...