为对抗β-内酰胺酶介导的抗生素耐药，需要鉴定新型抑制剂。本研究利用噬菌体展示库从随机12肽库中筛选出三个结合青霉素酶的肽：P1（DHIHRSYRGEFD）、P2（NIYTTPWGSNWS）和P3（SHSLPASADLRR）。采用表面等离子共振（SPR）对筛选肽与青霉素酶的结合特异性进行定量比较。以P3-GGGC（SHSLPASADL...
抗生素耐药（AR）是全球公共卫生日益严重的威胁，亟需简化并加速临床检测与分类。本文提出一种功能型抗生素耐药检测（FARA）生物传感策略。该策略包含三个关键部分：第一，FARA 直接测量抗生素耐药酶催化降解抗生素时产生的热信号；第二，通过分析一组抗生素建立样品特异的 AR 谱，提高信息量；第三，对 AR 谱数据库进行元分析，将谱型与诊...
抗体类产品在诊断、医学影像和治疗中具有重要价值，且副作用少。本研究利用蛋白质工程技术，将抗鸡卵白溶菌酶（HEWL）的骆驼源单域抗体片段 cAb-Lys3 插入地衣芽孢杆菌 β-内酰胺酶 BlaP 的溶剂暴露环中，构建 BlaP-cAb-Lys3 杂交蛋白。结果表明，该杂交蛋白保留 β-内酰胺酶活性，所展示的纳米抗体仍能以纳摩尔级亲和...
本文提出一种新型电化学发光（ECL）生物传感器用于检测β-内酰胺酶。作者将Ru(phen)2(cpaphen)2+与氨苄西林（Amp）连接形成Ru-Amp复合物，使其既作为β-内酰胺酶的特异性识别元件，又作为ECL发光试剂。通过静电吸附和分子间π-π作用，将大量Ru-Amp负载到由3-巯基苯丙酸（TA）还原制备的金纳米粒子（TA@A...
生物传感器在食品工业中可用于头孢菌素检测，以降低污染、保障食品安全并减少抗生素耐药性传播。利用β-内酰胺酶与其头孢菌素底物/抑制剂之间的特异性相互作用，作者此前构建了基于荧光素标记的C类β-内酰胺酶突变体V211Cf的生物传感器，用于无试剂检测头孢菌素和C类β-内酰胺酶抑制剂。当加入底物或抑制剂时，分析物改变共价连接在酶活性位点附近...
快速检测对大规模样品筛查具有重要意义。本研究建立了一种基于酶热敏电阻的直接竞争酶联免疫吸附法（dcTELISA），用于快速检测莠草津（ATZ）。样品中的ATZ与β-内酰胺酶标记的ATZ（ATZ–E）竞争结合固定在控孔玻璃（CPG）免疫反应器上的抗ATZ单克隆抗体（mAb）结合位点，形成免疫复合物。研究优化了ATZ–E浓度、酶底物种类...
由于乳制品中抗生素残留受到法规限制，中国曾出现非法添加β-内酰胺酶以降低牛奶中抗生素水平的现象。本文报道了一种基于酶热敏器（enzyme thermistor, ET）快速、灵敏、便捷监测牛奶中β-内酰胺酶活性的方法。将固定量的青霉素G（penicillin G, Pen G，β-内酰胺酶特异性底物）加入牛奶样品并孵育，使样品中的β...
β-内酰胺酶与环境敏感荧光素偶联于催化位点附近Ω-loop第166位，是检测β-内酰胺抗生素的高效生物传感器，但其分子机制尚不清楚。本研究报道A类β-内酰胺酶PenP（来自Bacillus licheniformis 749/C）经E166C突变后在166位偶联荧光素的晶体结构，包括apo形式PenP-E166Cf及与cefotax...
本研究采用层层自组装技术，将羧基化多壁碳纳米管（MWCNTs）、血竭素（hematein）和β-内酰胺酶共同固定在玻璃碳电极（GCE）表面，构建了一种灵敏度增强的安培型青霉素生物传感器。固定化β-内酰胺酶催化青霉素水解，使电极表面局部pH下降；血竭素作为pH敏感氧化还原探针，将pH变化转换为可测量的安培电流信号。MWCNTs既作为电...
本文报道了一种基于达尔文生存选择的 Affibody 分子亲和力成熟策略。作者利用 β-内酰胺酶蛋白片段互补分析（PCA）系统，在大肠杆菌周质中通过目标蛋白与库成员结合驱动 β-内酰胺酶活性重建，使具有 TNFα 结合能力的克隆获得在含氨苄青霉素选择培养基中的生长优势。研究首先考察了 IPTG 诱导水平、相互作用亲和力和选择压力对系...
短肽由极性或离子氨基酸与短有机硫醇组成，可显著降低血清和粗细胞裂解液等复杂生物基质中的非特异蛋白吸附，其中血清和粗细胞裂解液的非特异蛋白浓度分别为76和30–60 mg/mL。作者通过固相法合成不同链长和氨基酸组成的短肽库，将3-巯基丙酸（3-MPA）共价连接至肽的氨基端，形成3-MPA-(AA)n-OH并在金表面自组装成单分子层。...
蛋白片段互补检测（PCA）基于不同报告蛋白，可用于监测活细胞中动态蛋白-蛋白相互作用。本研究构建基于 TEM-1 β-内酰胺酶基因分裂的 PCA 系统，用于在大肠杆菌周质中筛选特异性相互作用蛋白，并应用于从组合库中筛选结合人肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的 affibody 分子。编码约 10^9 个 affibody 库成员与 β...
本文报道了一种基于鸽棱镜（dove prism）的波长扫描式表面等离子共振（SPR）生物传感器。BK7 鸽棱镜可将准直光束成像反转，其全内反射角为 72.8°，该角度可激发 SPR，因此同一光学平台既能进行波长扫描式 SPR 生物传感，也可进行 SPR 成像。该构型在各光学元件间采用单轴光路，简化仪器设计而不牺牲分析性能，并集成流体...
在表面等离子共振（SPR）生物传感器中，生物样品中的血清蛋白易非特异性吸附于传感表面，产生难以区分的背景响应，限制生物标志物定量。为降低该问题，作者以19种天然氨基酸与3-巯基丙酸偶联，制备N-3-巯基丙基氨基酸（3-MPA-氨基酸）自组装单分子层（SAM），并采用SPR和Ge衰减全反射傅里叶变换红外光谱（GATR FTIR）表征。...
荧光素标记的 PenPC β-内酰胺酶 E166C 突变体（E166Cf）是从非变构蛋白构建“开关型”荧光生物传感器的成功模型。本文重点研究 E166Cf 在 β-内酰胺抗生素结合与水解过程中荧光变化的传感机制。利用电喷雾质谱和停流荧光研究 E166Cf 与头孢呋辛、青霉素 G 及 6-氨基青霉烷酸（6-APA）的相互作用，发现酶-...
本文报道了一种新型混合生物传感器，用于牛奶中β-内酰胺类抗生素残留的检测与推定鉴定。该方法基于对二氧化碳（CO2）的测量，CO2的产生与指示菌 Bacillus stearothermophilus var. calidolactis 的微生物生长相关。牛奶中β-内酰胺的存在会抑制该菌生长，从而降低CO2产生速率。分析通过比较含β-...