本文评论了 Stoeber 等利用遗传编码荧光构象生物传感器解析活神经元中阿片受体激活时空组织的研究。阿片受体（MOR、DOR、KOR）介导内源肽与外源药物作用，但其激活后的亚细胞定位与信号机制长期不清。作者将可稳定 MOR 激活态的 Nb33 纳米抗体与 GFP 融合，构建 OR sensor，使其仅在配体结合激活态受体上产生荧光...
阿片受体（ORs）在内源阿片肽激活下可精确调节行为，但被非肽阿片药物激活时易产生病理效应。传统观点认为受体激活主要发生在质膜，但药物与肽在靶神经元中的细胞差异仍不清楚。本文开发了一种遗传编码的构象生物传感器 OR sensor，其核心为特异性识别激活构态 μ/δ 阿片受体的纳米抗体 Nb33，并与 EGFP 或 pmApple 荧光...
生物传感器在病原检测、分子诊断、环境监测和食品安全控制中日益重要。本研究以β-内酰胺酶作为高效报告酶，用于蛋白质-蛋白质相互作用研究。β-内酰胺酶能够接受肽段或结构化蛋白/结构域插入，适合构建嵌合蛋白。作者将单域抗体片段（纳米抗体）插入 Bacillus licheniformis BlaP β-内酰胺酶中，所得杂合蛋白在保持β-内...
核苷二磷酸激酶A（NDPK-A）是一种转移抑制蛋白，也是多种肿瘤细胞中抑制潜在转移的生物标志物。本文报道了一种基于ZnO纳米棒阵列的简单光电化学免疫传感器，用于灵敏检测NDPK-A。ZnO纳米棒阵列经CdS纳米颗粒和Mn2+共敏化后，在光照下表现出高且稳定的光电流响应。将抗NDPK-A纳米抗体固定于ZnO纳米棒阵列表面后，通过监测免...
本研究开发了一种基于纳米抗体的间接竞争酶联免疫吸附测定（Nb-ELISA），用于检测谷物中赭曲霉毒素A（OTA），并具有较高的谷物基质抗干扰能力。四个抗OTA纳米抗体（Nb15、Nb28、Nb32、Nb36）在大肠杆菌中表达，并与OTA单克隆抗体6H8比较热稳定性。所有纳米抗体在95°C处理5 min或90°C处理75 min后仍保...
本研究开发了一种新型免疫荧光生物传感器，利用新型纳米抗体（Nb）和铁-聚合物-石墨烯纳米复合材料，对转基因（GM）作物生物标志物——根癌农杆菌 CP4 菌株来源的 5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（CP4-EPSPS）进行灵敏检测。具体地，通过原位聚合及后续与水合肼的一锅反应，制备了铁掺杂聚丙烯酸酰肼修饰还原氧化石墨烯纳米复合材料...
生物与合成识别元件是现代生物传感器检测毒素的核心。传统上，酶和抗体常被用作毒素检测的识别元件。自20世纪70年代以来，替代性生物与合成结合分子逐渐兴起，成为实验室和现场检测中常规生物识别元件的有前景替代方案。近期研究对重组酶方法和纳米酶表现出极大兴趣，以克服天然酶的缺陷。在抗体领域，基于体内合成材料修饰和体外展示系统的技术被引入。分...
表面生物偶联是开发先进生物材料（包括生物传感器）的关键。传统物理吸附或基于内源氨基酸功能基团的共价偶联常导致表面活性低、重复性和可重复使用性差。本研究通过表达蛋白连接（EPL）在靶向血管细胞黏附分子-1（VCAM1）的纳米抗体 C 端引入炔基，再利用铜(I)催化叠氮-炔环加成（CuAAC）点击化学，将其共价且均匀取向地偶联到叠氮化硅...
以睾酮免疫双峰驼后，构建了重链抗体可变域（VHH）或纳米抗体（Nb）噬菌体展示库。纳米抗体分子量小（15 kD）、溶解性好、稳定性高、亲和力和特异性高、免疫原性低，是下一代诊断和医学应用的有前景工具。睾酮是生殖激素，在正常心脏功能中起重要作用，也是多种疾病的高预测标志物。本文成功开发了一种基于电化学阻抗谱（EIS）和纳米抗体的简单灵...
聚(ADP-核糖)聚合酶1（PARP1）是DNA修复、基因组稳定性和细胞存活的关键因子，也是癌症治疗的重要靶点。为深入理解PARP生物学及PARP1靶向抗癌化合物的作用机制，作者开发了一种在体外和活细胞中均有效的新型PARP1亲和试剂。该PARP1生物传感器基于PARP1特异性单域抗体片段（纳米抗体，约15 kDa），以纳摩尔亲和力...
抗体类产品在诊断、医学影像和治疗中具有重要价值，且副作用少。本研究利用蛋白质工程技术，将抗鸡卵白溶菌酶（HEWL）的骆驼源单域抗体片段 cAb-Lys3 插入地衣芽孢杆菌 β-内酰胺酶 BlaP 的溶剂暴露环中，构建 BlaP-cAb-Lys3 杂交蛋白。结果表明，该杂交蛋白保留 β-内酰胺酶活性，所展示的纳米抗体仍能以纳摩尔级亲和...
单域抗体是重组表达的无轻链功能性抗体，来源于骆驼科动物重链抗体，具有分子小、稳定性高、溶解性好和可高表达等特性。本研究展示了单域抗体作为生物传感器捕获分子的潜力。作者以抗绿色荧光蛋白（GFP）单域抗体（GFP-Nb）为模型，分别采用 Ni2+:NTA-多组氨酸标签、抗体-抗原、生物素-链霉亲和素以及胺基偶联等策略将其固定到 SPR ...
甲型H5N1流感病毒可感染人类并导致死亡，暴发前及时诊断对公共卫生至关重要。现有临床生化诊断方法仍存在不足，市售H5N1诊断试剂盒多依赖传统单克隆抗体，难以满足临床应用需求。纳米抗体（Nanobody/VHH）具有分子量小、特异性高、稳定性好和易于大量表达等优点，是诊断与治疗的潜在工具。本研究通过噬菌体展示技术从VHH文库中筛选获得...
本文报道了一种基于纳米抗体（Nanobodies, Nbs）的芯片式夹心免疫检测方法，用于人表皮生长因子受体2（HER2）胞外域检测。HER2过表达与侵袭性乳腺癌相关，是重要肿瘤标志物。Nbs来源于骆驼科重链抗体，分子量约15 kDa，具有小尺寸、高稳定性和可大肠杆菌表达等优点。检测中，捕获抗HER2纳米抗体通过EDC/NHS共价固...
本研究旨在通过易错PCR构建针对肉毒神经毒素E（BoNT/E）的重组单可变域（VHH）二级噬菌体展示突变库。作者以免疫骆驼来源、可结合BoNT/E重链结合域的特异性VHH基因为模板，采用易错PCR引入随机点突变，并将突变片段克隆至pComb3x噬菌粒载体，构建二级噬菌体展示库。随后通过多轮生物筛选，从展示BoNT/E Hc纳米抗体的...
骆驼科动物具有独特的重链抗体（HCAbs，VHH），商品名为纳米抗体（Nb），仅由重链同源二聚体组成。由于基于免疫骆驼的文库构建耗时、昂贵，且对某些抗原可能冗余，作者以非免疫骆驼血清为来源构建骆驼科 VHH 非免疫文库，获得具有亚纳摩尔亲和力、适合常规免疫应用的结合子代。该方法快速，可恢复更多样、非特异且不含特定抗体亚群的 VHH ...
在基础与应用 HIV 研究中，可靠检测病毒组分对监测感染进展至关重要。虽然体外检测病毒结构蛋白已用于诊断，但此前无法在不进行病毒遗传修饰的情况下，直接在活细胞中动态可视化 HIV。本文报道一种新型荧光生物传感器，用于动态追踪 HIV-1 在活细胞中的形态发生。作者通过免疫骆驼并筛选单域抗体库，获得特异性结合 HIV-1 衣壳蛋白 C...
布鲁氏菌对叙利亚公共卫生和畜牧业经济影响重大，因此亟需开发诊断与疫苗。此前作者从免疫骆驼中建立了广谱纳米抗体库，并筛选出布鲁氏菌特异性结合体 NbBruc02。蛋白组学提示其抗原为布鲁氏菌 60 kDa 热休克蛋白 GroEL/HSP-60。该抗原在布鲁氏菌感染巨噬细胞过程中的黏附与侵入中具有重要作用。本研究采用免疫层析法检测 Nb...
当前抗体难以区分布鲁氏菌（Brucella）与耶尔森菌（Yersinia）等近缘病原体，因为二者共享相同的脂多糖（LPS）O-链表位；同时布鲁氏菌病对公共卫生和畜牧业经济影响重大，亟需鉴定新的免疫原性蛋白以开发下一代疫苗。骆驼重链抗体来源的纳米抗体（Nanobody, Nb）具有小分子、高稳定性和强特异性，可用于感染性疾病研究。此前...
蛋白质错误折叠与聚集是许多严重神经退行性疾病的关键特征，因此表征脑脊液（CSF）中β-淀粉样蛋白（Aβ）和α-突触核蛋白（α-syn）等关键形式与形态的浓度谱，可作为这些疾病的有效诊断方法。CSF 中 tau 和 Aβ 水平已被证明对阿尔茨海默病（AD）具有良好生物标志物前景。然而，许多神经退行性疾病的发病与进展同包括不同 Aβ 和...