线粒体是真核细胞氧化磷酸化和 ATP 生成的主要场所，其功能异常与多种神经退行性疾病和药物毒性相关。氧耗是反映线粒体和细胞功能的重要指标，但传统极谱法在培养细胞中操作困难，且分离线粒体易造成损伤。本文基于 Becton–Dickinson 氧生物传感器微孔板建立了一种高通量、非侵入性活细胞线粒体耗氧检测方法。该微孔板底部硅胶橡胶基质...
G蛋白偶联受体（GPCR）是药物发现的重要靶点，绝大多数 GPCR 均可耦联 Ca2+ 信号。因此，许多基于细胞的高通量筛选（HTS）方法通过检测胞内 Ca2+ 变化来评估 GPCR 激活。传统方法使用荧光染料，其发射光强度与胞内 Ca2+ 浓度相关。另一种策略是重组表达生物传感器光蛋白，典型代表为水母素（aequorin）。这类光...
本文报道了一种双联无标记光学生物传感器细胞检测法，用于在 A431 细胞中同时检测两个内源 G 蛋白偶联受体：Gq 偶联的组胺 H1 受体（H1R）和 Gs 偶联的 β2 肾上腺素受体（β2AR）。检测分为两步：首先使用 Sigma LOPAC 化合物库进行激动剂筛选，随后用含 H1R 激动剂组胺和 β2AR 激动剂肾上腺素的混合溶...
细菌利用 N-酰基高丝氨酸内酯（AHL）分子以密度依赖方式调控基因表达。目前已开发多种生物传感器用于检测各类 AHL。本研究描述了一种基于 traI-luxCDABE 的生物传感器，用于快速检测 Burkholderia cenocepacia 和 Pseudomonas aeruginosa 已表征突变株中的 AHL，并可在液体和...
普遍存在的化学物质可能干扰对脊椎动物发育和生理至关重要的甲状腺系统。本研究建立并优化了一种基于表面等离子共振（SPR）生物传感器的高通量筛选方法，用于快速检测具有甲状腺素（T4）运输干扰活性的化合物。该方法以固定于生物传感器芯片表面的 T4 为配体，分别利用主要甲状腺激素运输蛋白甲状腺素结合球蛋白（TBG）和转甲状腺素蛋白（TTR）...
环核苷酸磷酸二酯酶（PDE）是催化cAMP和cGMP水解为5'-核苷酸单磷酸的胞内酶，通过调控环核苷酸浓度参与多种细胞信号事件，并已成为哮喘、心血管疾病、注意缺陷多动障碍、帕金森病和阿尔茨海默病等疾病的重要药物靶点。尽管纯化重组PDE酶与cAMP/cGMP底物组成的生化检测常用于化合物筛选，但基于细胞的检测能更真实地反映化合物在生理...
新型基因编码生物传感器利用改造的萤火虫荧光素酶，有望在活细胞中显著提升信噪比与响应动态范围。该类传感器在关闭状态下通过铰链结构阻碍荧光素酶与底物荧光素结合，仅在蛋白活性状态触发构象闭合时催化荧光素氧化并发光，从而获得接近零背景与数倍至二十倍以上的信号变化。由于响应特性优异，其特别适用于大孔板格式的高通量筛选，并可通过替换蛋白酶识别序...
本综述概述了功能蛋白质组学中用于研究蛋白定位、蛋白-蛋白相互作用、细胞内信号事件和第二信使生成的当前光学方法。文章讨论了利用荧光蛋白或生物发光蛋白标记的报告基因检测，以及近年来发展的细胞内生物传感器检测、基于流式细胞术的荧光细胞条形码、结合RNA干扰与自动成像的转染细胞微阵列等筛选平台。这些新方法可用于小分子注释、信号事件研究和表型...
甲状腺刺激素（TSH）受体属于7次跨膜受体糖蛋白激素受体亚家族，主要表达于甲状腺滤泡细胞，受TSH激活后调控滤泡细胞生长与功能。重组TSH用于甲状腺癌诊断筛查，但目前尚无选择性小分子TSHR激动剂。为筛选新型TSHR激动剂，作者将商品化细胞基环磷酸腺苷（cAMP）检测法微型化至1536孔板。该检测使用稳定转染TSHR并共表达环核苷酸...
表面等离子共振（SPR）是一种光电现象，可实时、无标记地记录配体与受体结合过程，并测定结合与解离速率常数，从而计算平衡解离常数。文章系统介绍 SPR 生物传感器在药物发现中的应用，包括靶点表征、化合物筛选、先导优化、临床前与临床支持以及生物制药生产。作者比较了 Biacore 2000/3000、Biacore S51、Biacor...