双相情感障碍、精神分裂症、自闭症和智力障碍等神经发育疾病严重影响数百万患者，但治疗进展受限于对分子机制认识不足。本研究通过靶向检索发现，编码330 kDa三重功能结构域（TRIO）蛋白的基因在神经发育疾病中存在新发突变富集。作者制备多种TRIO抗体，证明较小TRIO9亚型是脑内主要蛋白产物，且出生后水平下降。TRIO9含两个鸟苷酸交...
赤霉素（GA）是调控植物生长发育的关键植物激素，但其在活体细胞中的时空分布仍不清楚。作者利用酵母组合筛选平台，工程化了一种基于 Förster 共振能量转移（FRET）的光遗传生物传感器 GPS1，可感知纳摩尔水平的活性赤霉素。将核定位 GPS1（nlsGPS1）稳定表达于拟南芥后，可在细胞水平报告 GA 浓度。结果显示，在快速伸长...
尽管内源性亚硝酰（HNO）的产生与作用机制尚未完全阐明，药理学 HNO 供体已显示治疗前景并进入临床试验。质谱和定点突变显示，化学性质不同的 HNO 供体 1-硝基环己基乙酸酯（NCA）或安杰利盐（AS）均可诱导 cGMP 依赖性蛋白激酶 Iα（PKGIα）形成二硫键：包括两个亚基 Cys42 之间的分子间二硫键，以及高亲和力 cG...
PSD-95是突触后密度主要支架蛋白，参与双向突触可塑性，而可塑性对学习记忆至关重要。已知诱导可塑性时PSD-95动态性增加，但介导其作用的结构性与功能性变化仍不清楚。本文显示，PSD-95鸟苷酸激酶（GK）结构域Ser561的磷酸化由Par1激酶介导，可调控构象开关，并对双向可塑性重要。利用FRET生物传感器，作者发现Ser561...
纹状体中多巴胺的阶段性释放决定奖励学习与动作选择，但其对胞内信号动态的影响仍不清楚。本研究在小鼠纹状体脑片中利用基因编码 FRET 生物传感器，动态量化短暂多巴胺对 cAMP 或 PKA 依赖性磷酸化水平的影响，并结合计算模型探索该信号通路。表达 D1 或 D2 多巴胺受体的中型棘突神经元（MSN）分别以 cAMP 升高或降低响应多...
微管相关蛋白Tau是一种天然无序蛋白，参与多种神经退行性疾病（tauopathies），并在神经原纤维缠结中聚集。Tau如何从结合微管的状态转变为易聚集状态，以及tauopathy相关突变如何影响其在细胞中的行为仍不清楚。为此，作者开发了一种基于全长Tau蛋白的遗传编码FRET生物传感器（CST），用于在活细胞中实时监测Tau构象变...
本文介绍一套用于在不破坏细胞所处环境完整性的前提下研究细胞通讯的实验方案，重点分析脊髓神经元等可兴奋细胞的电活动。该方案以活体斑马鱼胚胎为模型，利用其神经系统简单、胚胎透明且适合成像的特点，在胚胎发育过程中对脊髓神经元细胞膜上的荧光电压指示器进行原位检测。作者将斑马鱼胚胎与基于荧光共振能量转移（FRET）的生物传感器 Mermaid...
小 GTP 酶 Cdc42 调控多种细胞过程的能力依赖于其活性的严格空间控制。Cdc42 功能在质膜（PM）研究最充分，可调控细胞骨架和细胞极性；活性 Cdc42 也存在于高尔基体，但其在高尔基体的作用与调控机制仍不完全清楚。本研究利用 Cdc42 FLARE 生物传感器，结合荧光寿命成像（FLIM）-FRET 的 phasor 分...
肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）是结合肿瘤坏死因子α或淋巴毒素α并调控炎症通路的跨膜受体。这些配体上调与类风湿关节炎、多发性硬化、克罗恩病等炎症和自身免疫疾病相关。现有抗TNF治疗通过清除游离配体减轻症状，但可能意外抑制配体与脱靶受体结合，引起狼疮样疾病和淋巴瘤风险。因此需要特异性靶向受体而非配体的新小分子。本研究构建了表达于活细胞...
细胞内 pH 是调控酶促代谢、跨膜转运及细胞存活的关键参数，其异常变化可导致蛋白错误折叠和细胞功能紊乱。为实现对细胞内 pH 的非侵入、高时空分辨率监测，作者构建了一套新型遗传编码 FRET 型 pH 生物传感器工具箱 FluBpH。该工具箱以 FMN 结合荧光蛋白 EcFbFP 作为 FRET 供体域；EcFbFP 对酸性环境具有...
血小板衍生生长因子受体（PDGFR）感知胞外生长因子并将信号转入细胞内，调控细胞增殖、迁移和存活。关于 PDGFR 位于哪些膜微区以及如何在不同微区调控多种胞内信号通路，仍存在争议。本研究开发了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的新型 PDGFR 生物传感器，可在活细胞中以高时空分辨率实时检测 PDGFR 活性。为研究膜微区中的亚...
体内显微镜（IVM）是一种可在活体动物组织中实时检测亚细胞信号或代谢事件的成像工具。然而，在高散射生物组织中成像时，激发光与发射光随深度增加而衰减，深度依赖性信号衰减是 IVM 的主要限制，使定量测量变得困难。因此，IVM 定量分析需要采用内部校准探针，或采用不同于强度测量的信号评估方式。本文描述了如何利用基因编码生物传感器探针的比...
区室化cAMP/PKA信号在生理和病理过程中具有重要意义，但局部cAMP/PKA信号的性质、调控与功能仍缺乏深入理解。本文报道了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的cAMP传感器CUTie，可以前所未有的精度检测区室化cAMP。CUTie可靶向定位于质膜、肌浆网和肌丝等特定多蛋白复合物，揭示不同位点局部cAMP信号在动力学和幅度上...
电压门控钠通道家族中多个成员受钙调蛋白（CaM）和钙离子调节。神经元钠通道NaV1.2同时结合去钙（apo）CaM和钙饱和（(Ca2+)4-CaM）。作者测定大鼠NaV1.2 IQ基序（IQRAYRRYLLK）与apo CaM和(Ca2+)4-CaM的平衡解离常数，分别为约3 nM和85 nM，表明apo CaM结合优势约30倍。N...
为在持续变化的环境中存活并正常功能，细胞必须感知周围环境变化并作出相应反应。细胞通过由众多离散信号分子组成的复杂信号网络处理环境信息；网络中的各通路通常高度整合且动态变化，使细胞对单一或多种刺激作出特异且适当的反应。然而，由于许多细胞信号网络规模庞大、结构复杂，往往难以预测其在特定条件下的响应；不同通路间的串扰甚至可能产生与单独分析...
基于 Förster 共振能量转移（FRET）的生物传感器可用于可视化生物和生理过程，并能在空间与时间维度提供详细信息。在 FRET 型生物传感器中，底物结合会引起两个荧光团相对位置变化，从而改变 FRET 效率，并可在荧光光谱中观察到。因此，其设计需要一种结合配体后发生构象变化的配体结合蛋白。然而，并非所有配体结合蛋白在与荧光蛋白...
基于 Förster 共振能量转移（FRET）的小分子生物传感器可在复杂细胞环境中以高时空分辨率监测小分子信号。FRET 传感器通常由一对荧光蛋白与合适的识别域（如溶质结合蛋白 SBP 超家族成员）融合构建。然而，天然 SBP 热稳定性低，可能限制生理条件下成像；其 N/C 端位置也可能不利于荧光蛋白融合，从而限制传感器动态范围。本...
基于 Förster 共振能量转移（FRET）的遗传编码生物传感器是活细胞成像的重要工具。作者团队此前开发了名为 ATeam 的 FRET 型 ATP 指示剂，用于在单个活细胞内可视化 ATP 水平，并进一步实现线粒体基质中 ATP 的实时监测。ATeam 由供体荧光蛋白、ATP 感应域和受体荧光蛋白组成，ATP 结合诱导感应域构象...
测定促性腺激素的生物活性对生殖医学和激素制剂生产至关重要。本研究建立了一种基于G蛋白偶联受体（GPCR）介导信号转导的检测方法，用于定量人绒毛膜促性腺激素（hCG）和促卵泡激素（FSH）的生物活性。活细胞中，受体特异性激活后细胞内环磷酸腺苷（cAMP）水平变化由Förster共振能量转移（FRET）生物传感器蛋白TEpacVV监测；...
尽管 EGFR 靶向抗癌药物已广泛进入临床，但总体生存获益有限，肿瘤内异质性被认为是治疗失败的重要机制。本研究应用荧光寿命显微镜（FLIM）生物传感技术，在活体肿瘤中检测 EGFR 活性异质性。作者使用遗传编码的 CrkII 基 FRET 生物传感器 Picchu-X，其 Y221 位点被 EGFR 磷酸化后发生构象变化，改变 eG...