基于 Förster 共振能量转移（FRET）的生物传感器可用于定量分析细胞内信号，包括环腺苷酸（cAMP）监测，受到广泛关注。串联生物传感器在供体激发波长下测量供体/受体发射比是常用方法，但该比值不仅随 cAMP 浓度变化，还会受离子环境或其他影响荧光蛋白折叠概率的因素影响。本文采用基于两种激发波长的光谱 FRET 分析方法，利用...
吞噬凋亡细胞需要吞噬细胞协调激活调控肌动蛋白动力学的 Rho 家族 GTP 酶。本研究利用 FRET 生物传感器实时可视化吞噬凋亡细胞过程中 Rac1 的时空激活。结果显示，凋亡细胞通常被吞噬细胞的片足吞噬，而片足区域 Rac1 处于激活状态；同一片足部位常连续吞噬多个凋亡细胞，提示存在凋亡细胞进入的门户。在该位置，激活的 Rac1...
本研究基于荧光共振能量转移（FRET）构建了 caspase-7 生物传感器 vDEVDc，用于研究细胞凋亡执行蛋白酶 caspase-7 的蛋白水解特性。vDEVDc 由 ECFP 供体、含 DEVD 识别序列的 24 氨基酸连接肽和 Venus 受体组成。N 端缺失 56 个残基的活性同工型 57casp7 可在识别序列处切割 ...
蛋白激酶和磷酸酶在细胞内形成复杂的信号网络，其活性需要在空间和时间上精确协调。为理解信号转导网络的调控机制，有必要在天然细胞环境中定义蛋白激酶和磷酸酶的时空动态。本文报道了一种遗传编码蛋白生物传感器的开发，用于特异性探测钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白磷酸酶钙调磷酸酶（calcineurin, CaN）的活性。该报告分子采用磷酸酶活性依赖...
膜型1基质金属蛋白酶（MT1-MMP）通过蛋白水解重塑细胞外基质，在癌细胞生物学中发挥关键作用。本研究利用荧光共振能量转移（FRET）成像技术开发了一种新型生物传感器，其传感元件锚定于细胞膜细胞外表面，可在活细胞中以亚细胞分辨率动态可视化 MT1-MMP 活性。表皮生长因子（EGF）在表达 MT1-MMP 的癌细胞中诱导显著 FRE...
荧光共振能量转移（FRET）结合荧光蛋白是检测细胞内蛋白相互作用、酶活性和小分子的重要方法。受一种新型紫激发黄色荧光蛋白的启发，作者开发了基于双FRET的caspase-3生物传感器。由于两套FRET对具有明显不同的激发光谱，每个FRET生物传感器在另一个存在时均可进行比率成像。文中报道了通过定向进化获得的紫激发黄色荧光蛋白mAme...
K-Ras 通过 C 端法尼基异戊二烯修饰和邻近多碱性区与质膜结合，其膜定位可受多碱性区净电荷调节。蛋白激酶 C（PKC）磷酸化多碱性区 Ser181 可中和正电荷，从而调节法尼基-静电开关，控制 K-Ras 与质膜的结合；该开关激活还可促进凋亡。本章介绍多种方法：利用 32P 代谢标记、免疫沉淀、SDS-PAGE 和磷成像直接分析...