同时监测活细胞内多种蛋白的转运具有重要价值，因为许多受体蛋白在同一细胞中协同发挥作用，但现有荧光标记技术限制了功能受体对的机制研究。作者将荧光激活蛋白（FAP）技术与高通量流式细胞术结合，发展出一种稳健、灵敏且通用的新型生物传感器，用于在同一细胞中研究多种转运蛋白。该模型系统采用与人β2肾上腺素受体（b2AR）融合的FAP AM2....
环磷酸腺苷（cAMP）是多种G蛋白偶联受体（GPCR）的第二信使，也是评价GPCR特异性配体生物活性的有用读出分子。本文报道了一种基于Förster共振能量转移（FRET）的cAMP生物传感器Epac2-camps，并将其与杆状病毒BacMam转导系统相结合。所构建的BacMam-Epac2-camps病毒转导系统可简便、稳健地在多...
背景：苏氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Taspase1）可切割混合性白血病（MLL）蛋白及致白血病MLL融合蛋白，但缺乏小分子抑制剂和细胞功能检测体系。方法/结果：本研究建立了用于在活细胞内探测Taspase1功能的高效细胞生物传感器。该传感器由谷胱甘肽S-转移酶（GST）、自荧光蛋白变体、Taspase1切割位点以及核输入/输出信号组合构...
高通量筛选（HTS）可鉴定生物过程的化学调节剂，但细胞培养模型中筛选出的化合物在体内常有毒性或药理学不活跃。整动物模型筛选有助于避免这些问题并加速药物开发。秀丽隐杆线虫（C. elegans）体积小（<1 mm），可经济地液体培养和分配，且实验可操作性强，适合 HTS。本文描述了培养并分配荧光线虫品系，用于高通量筛选化学库或检测改变...
本文建立了一种基于发光氧通道（LOC）的均相生物传感器，用于定量检测小GTPase的激活状态。该体系由光敏剂修饰的供体微球和发光体修饰的受体微球组成：供体微球通过谷胱甘肽或链霉亲和素固定效应蛋白，受体微球通过蛋白A或Ni2+螯合固定抗体或His标签蛋白。当GTP结合态GTPase同时与效应蛋白和抗体结合时，供体与受体微球被拉近至20...
配体依赖性受体内化是 G 蛋白偶联受体（GPCR）信号脱敏的重要机制。传统下游报告基因或第二信使检测易受脱靶效应影响，而 GFP 融合蛋白虽可直接标记受体，但单细胞荧光强度不随响应变化，不适合基于信号强度的高通量筛选。本文报道一种基于荧光激活蛋白（FAP）技术的活细胞生物传感器，用于检测人 β2 肾上腺素能受体（b2AR）的内化。作...
本文报道了一种用于发现潜在钙调蛋白（CaM）抑制剂的荧光检测新方法。作者通过定点突变将人钙调蛋白第124位甲硫氨酸替换为半胱氨酸，获得 hCaM M124C，并经疏水交换层析和阳离子交换层析纯化。随后用硫醇反应性荧光探针单溴双咪胺（mBBr）共价修饰 Cys124，得到 hCaM M124C–mBBr。该标记蛋白在远紫外圆二色和 C...
线粒体是真核细胞氧化磷酸化和 ATP 生成的主要场所，其功能异常与多种神经退行性疾病和药物毒性相关。氧耗是反映线粒体和细胞功能的重要指标，但传统极谱法在培养细胞中操作困难，且分离线粒体易造成损伤。本文基于 Becton–Dickinson 氧生物传感器微孔板建立了一种高通量、非侵入性活细胞线粒体耗氧检测方法。该微孔板底部硅胶橡胶基质...