Metal impurities cause false positives in high-throughput screening campaigns.
化合物库中的有机杂质常导致新药先导化合物高通量筛选（HTS）中的假阳性信号，但有机杂质并不能解释全部假阳性结果。本文报道在罗氏筛选库中发现无机杂质同样可造成多种靶标和/或读出系统的假阳性信号，涉及生化检测与生物传感器检测。作者以蛋白精氨酸脱亚胺酶4（Pad4）项目为例，发现部分活性化合物批次含有高达总质量20%的锌杂质，而重新合成且...
Evaluation of a new high-throughput method for identifying quorum quenching bacteria.
群体感应（QS）是细菌依赖种群密度同步生物膜形成、生物发光和毒力因子分泌等社会行为的机制。酶促干扰 QS 的群体淬灭（QQ）被视为有前景的抗毒力策略。为高效鉴定 QQ 细菌，作者基于生物传感器农杆菌 A. tumefaciens A136 建立了一种简单、灵敏且高通量的方法。该方法通过对 β-半乳糖苷酶活性进行细胞密度归一化，消除因...
Development of a high-throughput screening-compatible cell-based functional assay to identify small molecule probes of the galanin 3 receptor (GalR3).
加兰尼3受体（GalR3）属于G蛋白偶联受体（GPCR）家族。GalR3与GalR1、GalR2及其内源配体加兰尼肽参与多种生理和病理生理过程，尤其与成瘾、焦虑和抑郁等情绪障碍密切相关。尽管GalR3是药物发现的重要靶点，但选择性小分子调节剂报道很少。由于GalR3在重组细胞体系中细胞表面表达差，难以建立基于细胞的功能测定。本文报道...
AutomiG, a biosensor to detect alterations in miRNA biogenesis and in small RNA silencing guided by perfect target complementarity.
miRNA 生物发生或活性缺陷与发育异常和多种疾病相关。在果蝇中，miRNA 主要装载到 Argonaute-1（Ago1），引导靶 RNA 沉默；同时 miRNA 通路也与 RNA 干扰（RNAi）通路重叠，部分 miRNA 可结合 RNAi 效应因子 Argonaute-2（Ago2）。作者构建了一个基因构建体，由单一诱导型启动...
Imaging proteolytic activity in live cells and animal models.
除蛋白降解外，蛋白酶作为信号转导通路的正负调控因子，其失调与多种疾病相关。凋亡相关 caspase 家族蛋白酶异常激活与癌症、自身免疫和炎症等疾病有关。为更好理解蛋白酶在健康与疾病中的作用，本文报道一种可在活细胞和小鼠模型中定量报告蛋白酶活性的生物发光传感器，称为 GloSensor Caspase 3/7。该传感器具有 50–10...
Fluorescent biosensors for the detection of HMGB1 release.
坏死及某些凋亡情况下，非组蛋白染色质成分高迁移率族蛋白B1（HMGB1）会释放到胞外。胞外HMGB1可结合树突状细胞表面Toll样受体4（TLR4），作为危险相关分子模式提示机体存在应激，并被认为是免疫原性细胞死亡的关键特征之一。因此，只有能诱导HMGB1释放的抗肿瘤药物才可能激发抗肿瘤免疫应答。为在高通量水平评估常规抗肿瘤药物和新...
Transcription factor-based screens and synthetic selections for microbial small-molecule biosynthesis.
代谢工程不断拓展微生物生产小分子的目标范围，但多数小分子难以直接筛选，且其合成通常不提高宿主适应性，使菌株改良长期受限。本文提出一种基于转录因子生物传感器筛选或选择改良小分子合成的通用策略。作者将四环素抗性基因置于小分子诱导启动子下游，使宿主在四环素压力下的抗性与生长率同培养基中小分子浓度或细胞内小分子生产表型相耦合。利用来自 Ps...
BRET Biosensor Analysis of Receptor Tyrosine Kinase Functionality.
生物发光共振能量转移（BRET）是用于分析生物分子蛋白相互作用的改进型共振能量转移技术。BRET可应用于多种跨膜受体，但早期文献多集中于G蛋白偶联受体（GPCR），而用于受体酪氨酸激酶（RTK）活性研究的报道相对有限。这一现象令人意外，因为RTK常以二聚化作为激活关键，并且是癌症、糖尿病、神经退行性和呼吸系统疾病的重要治疗靶点。本综...
A new helicase assay based on graphene oxide for anti-viral drug development.
氧化石墨烯（GO）因独特的物理化学性质、良好生物相容性和强荧光猝灭能力，在生物传感与药物递送领域受到关注。本文综述了基于GO的生物传感器研究进展，重点介绍一种新型解旋酶活性检测平台——GO解旋酶活性检测法（GOHA）。该平台利用GO对单链DNA（ssDNA）优先于双链DNA（dsDNA）的吸附特性，以及GO对DNA偶联荧光染料的猝灭...
Computational design and biosensor applications of small molecule-sensing allosteric ribozymes.
本文报道了用于设计小分子感应别构核酶的计算方法，这些核酶可作为具有 NOT 或 YES 布尔逻辑功能的逻辑门。作者通过建模 RNA 二级结构，将茶碱适配体与扩展型锤头核酶融合，获得在生理相关条件下具有 1.3 min−1 高切割速率的茶碱感应核酶；该核酶对茶碱高度特异，不响应仅相差一个甲基的咖啡因。嘌呤感应核酶则通过将最小锤头核酶与...
High-throughput flow cytometry compatible biosensor based on fluorogen activating protein technology.
同时监测活细胞内多种蛋白的转运具有重要价值，因为许多受体蛋白在同一细胞中协同发挥作用，但现有荧光标记技术限制了功能受体对的机制研究。作者将荧光激活蛋白（FAP）技术与高通量流式细胞术结合，发展出一种稳健、灵敏且通用的新型生物传感器，用于在同一细胞中研究多种转运蛋白。该模型系统采用与人β2肾上腺素受体（b2AR）融合的FAP AM2....
A novel luminescent biosensor for rapid monitoring of IP3 by split-luciferase complementary assay.
肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）是调控多种生理信号过程的关键第二信使，其含量异常与多种疾病相关，因此需要快速、灵敏且可高通量监测IP3动态变化的方法。本文报道了一种基于分裂荧光素酶互补策略的新型发光生物传感器，用于直接检测IP3。该传感器将人源IP3受体2型（IP3R2）的IP3结合核心域（IBC）融合于萤火虫荧光素酶（FLuc）两...
Quantitative analysis of the interaction of constitutive androstane receptor with chemicals and steroid receptor coactivator 1 using surface plasmon resonance biosensor systems: a case study of the Baikal seal (Pusa sibirica) and the mouse.
构成性雄烷受体（CAR）既有较高基础转录活性，又是配体依赖性转录因子。不同物种 CAR 配体谱不同，但化学物质激活 CAR 的机制及物种差异尚未完全阐明。本研究建立表面等离子共振（SPR）系统，定量分析贝加尔海豹（bsCAR）和小鼠（mCAR）配体结合域（LBD）与候选化学物质及甾体受体共激活剂1（SRC1）的相互作用。作者用小麦胚...