血管紧张素转换酶1（ACE1）通过催化血管紧张素I转化为具有缩血管作用的血管紧张素II，参与体液和血压调节。已有研究表明，部分天然来源化合物可抑制血管紧张素转换酶活性并发挥降压作用。表面等离子共振（SPR）生物传感器技术是观察生物分子相互作用的行业标准方法。本研究采用分子模拟方法评估多种中药代谢物与ACE1蛋白的对接能，利用SPR实...
SHARPIN 是 E3 连接酶复合体 LUBAC 的辅助亚基，通过其中部泛素样域（UBL）参与 LUBAC 形成，并与催化亚基 HOIP 的泛素相关域（UBA）相互作用。然而，SHARPIN N 端 UBL 域在稳定 LUBAC 形成中的作用尚不明确。本研究采用分子生物学方法构建了 SHARPIN 1–127 域、128–309 ...
多种细菌 F1-ATPase 的 ε 亚基可结合 ATP，且该结合参与热菌 Bacillus sp. PS3 来源 F1-ATPase（TF1）的活性调控。作者此前通过检测偶联染料标记 ε 亚基的荧光变化，报道野生型 TF1 ε 亚基在 25 °C 下对 ATP 的解离常数为 4.3 μM，但发现该表观亲和力随所用染料不同而变化。为...
可卡因结合适配体具有一个不寻常特性：它结合奎宁的亲和力远高于其筛选目标可卡因。本研究将该适配体可结合的小分子配体范围扩展至奎宁基抗疟药阿莫地喹、甲氟喹、氯喹和伯氨喹。等温滴定量热（ITC）结果表明，阿莫地喹与可卡因结合适配体的结合亲和力为（7±4）nM，是目前已知最紧密的适配体–小分子结合亲和力之一。阿莫地喹、甲氟喹和氯喹的结合同时...
采用选择性蛋白水解切除与提取相结合的亲和质谱方法，并联合 MALDI 和 ESI 质谱，鉴定乳糖、GalNAc 和血型寡糖在人半乳糖凝集素-3（hGal-3）及大豆凝集素（glycine max lectin）中的表位结合位点。所鉴定表位肽包含碳水化合物识别所需的关键氨基酸，与已有 X 射线晶体结构一致。利用自动 Barocycle...
本文报道了一种用于快速生物传感的高速横向流动策略，可在苛刻条件下提高生物传感器的选择性和结合亲和力。该策略将生物传感器固定在圆形旋转盘中心以外的位置，并在检测过程中旋转圆盘，使目标溶液在传感器表面形成高速横向流动。以生物素化 SiO2 基底检测 FITC 标记链霉亲和素、IL-13 抗体化 SiO2 基底检测 IL-13 抗原为模型...
副黏病毒血凝素（H）与融合蛋白（F）之间的特异性动态相互作用是感染过程中构象重排和膜融合的前提。F蛋白的两个七肽重复区（HRA和HRB）均对F蛋白的触发具有重要意义。本研究采用生物传感器表面等离子共振（SPR）技术，对小反刍兽疫病毒（PPRV）H蛋白与F蛋白、HRA和HRB之间的直接相互作用进行定量评价。将重组pCMV-HA-H（H...
来自 Cellulosimicrobium cellulans DK-1 的内切-1,3-β-葡聚糖酶在催化结构域 C 端具有碳水化合物结合模块（CBM-DK）。CBM-DK 含有不完整的串联 α、β 和 γ 重复单元，其中 α 重复单元主要贡献 β-葡聚糖结合，这一特性源于 α 重复单元中的 Trp273，而 β 和 γ 重复单元...
G-四联体序列广泛存在于真核和原核生物中，研究其与小分子配体的相互作用对基因治疗、生物传感器构建和荧光成像具有重要意义。本文利用亚甲基蓝（MB）固有的电化学活性，基于微型化电化学装置，系统研究了MB与多种分子内G-四联体的相互作用。尽管圆二色光谱显示过量MB对不同分子内G-四联体构象的影响不明显，但方波伏安法可快速、简便地区分MB与...
漆酶在工业与生物技术中具有广阔应用前景，其对酚类化合物的亲和力使其在生物修复领域尤为重要。本研究将表面等离子共振（SPR）作为生物传感器，把漆酶固定化于芯片表面，用于研究小分子与漆酶的相互作用。漆酶采用硫醇偶联法固定，随后在毫摩尔浓度范围内分析含有不同数量羟基化合物的结合亲和力。研究考察了间苯三酚、藏红花素、抗坏血酸、曲酸和藏红花等...
小分子抑制剂曾被用于慢性疼痛治疗药物的筛选。本研究采用表面等离子共振（SPR）光谱法，对先前通过125I-NGF结合实验鉴定的已知神经生长因子（NGF）抑制剂进行亲和力与结合能力表征。作者建立了一种新的NGF抑制剂表征策略，将NGF固定化于SPR芯片表面，直接测定各化合物与NGF的结合常数（KD）及饱和能力。在筛选的化合物中，74%...
准确测定具有多个结合位点的大分子化学计量和逐步结合常数是分子相互作用研究的重要挑战。美国生物分子资源设施协会分子相互作用研究组（MIRG）旨在展示生物物理技术如何定量表征分子相互作用，并帮助用户理解核心技术的适用性与局限。本文开发了一种稳健的模型蛋白相互作用对，由解淀粉芽孢杆菌胞外核糖核酸酶 barnase 的二价变体 binase...
本研究探索L-甲硫氨酸衍生物作为核酸纯化潜在亲和配体的应用。作者以EDC/NHS活化L-甲硫氨酸的羧基，再将其固定到经乙二胺处理的胺传感器表面，使氨基游离用于与寡核苷酸相互作用。采用表面等离子共振（SPR）生物传感器定量测定该配体对寡核苷酸的亲和力。结果表明，对单碱基而言，胞嘧啶和胸腺嘧啶的亲和力最高，腺嘌呤次之，鸟嘌呤最低；对异源...
为开发基于亲和力的生物传感器平台，需要具有可用于表面固定的功能手柄的合适配体。为此，作者设计并合成了一组含不同叠氮连接臂的木瓜蛋白酶抑制剂，用于后续通过无铜应变促进叠氮–炔烃环加成（SPAAC）点击化学固定到传感器表面。同时开展分子对接研究，以判断叠氮手柄在哪些位置可被容忍而不影响配体与木瓜蛋白酶的结合亲和力。结果表明，尽管叠氮基团...
为深入理解β-丙氨酸（β）取代及杂环数目对DNA结合亲和力与选择性的影响，作者研究了八环发夹聚酰胺（PA）及其两个β衍生物和一个六环类似物与同源DNA序列5′-TGGCTT-3′的相互作用，并利用同源DNA和五个突变DNA评估结合选择性与β效应。研究采用互补的能量与结构方法，包括紫外热熔融、生物传感器表面等离子共振（SPR）、等温滴...
ClpXP ATPase-蛋白酶复合物是细胞蛋白质量控制体系的关键组分。ClpX 由可形成二聚体的锌结合域（ZBD）和依赖 ATP 组装成六聚体的 AAA+ 域组成。本研究利用核磁共振（NMR）和突变分析，报道了 ClpX 底物 λ 噬菌体蛋白 O（λO）在 ClpX ZBD2 上的结合位点。结果显示，λO 与 ZBD2 较大表面上...
本文在大肠杆菌中过表达来源于 Cellulosimicrobium cellulans 内切-1,3-β-葡聚糖酶催化结构域 C 端的碳水化合物结合模块 13（CBM13，CBM-DK），并利用表面等离子共振（SPR）生物传感器和等温滴定量热（ITC）分析其与 β-葡聚糖、层流胶（laminarin）及层流寡糖（laminariol...
进入或离开细胞核的货物通常由 importin β 家族受体介导，通过核孔复合体完成转运。酿酒酵母含有 14 个该家族成员，可分为 importin 和 exportin。Ran GTPase 通过其 GTP 结合状态调控受体与货物的结合、解离及转运方向，且受体仅在核内与 Ran-GTP 结合。本研究利用生物传感器测量了全部酵母转运...
生物分子相互作用的结合亲和力通常可通过表面等离子共振（SPR）传感器图拟合直接获得。传统方法将一系列分析物浓度依次注入单一固定配体表面，并在每次注射之间进行解离和表面再生，以获取结合行为信息。本文提出一种替代方法：将单一分析物浓度注入微阵列格式中多个不同配体密度，从而估计结合亲和力。该方法省去多次分析物注射和表面再生步骤，适用于分析...