Monitoring protein-small molecule interactions by local pH modulation.
我们开发了一种在体相水溶液中检测蛋白–小分子及蛋白–离子相互作用的技术。该方法将 pH 敏感荧光染料 5-(和-6)-羧基荧光素偶联到指定捕获蛋白表面的游离赖氨酸残基上。由于染料周围局部电场随配体结合而改变，其表观 pKa 发生变化，导致荧光强度改变；小分子结合和离子结合分别引起约 6% 和 15% 的荧光变化。该变化可源于分析物电...
Biosensor for on-line fluorescent detection of trifluoroperazine based on genetically modified calmodulin.
本文报道了一种基于荧光标记人钙调蛋白（CaM）突变体hCaM M124C-mBBr的在线荧光生物传感器，用于检测人尿中吩噻嗪类药物三氟哌嗪（TFP）。该突变体通过戊二醛共价固定于经3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APTES）功能化的控制孔玻璃（CPG）珠上，并装填于连续流微池中；微池连接分叉光纤与荧光分光光度计，实现自动化在线监测。研究优...
Fluorescence resonance energy transfer-based sensor Camui provides new insight into mechanisms of calcium/calmodulin-dependent protein kinase II activation in intact cardiomyocytes.
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（CaMKII）是心脏细胞内信号转导的关键介质，但现有工具难以在活心肌细胞中动态评估其定位与激活状态。本研究采用新型荧光共振能量转移（FRET）生物传感器 Camui，其全长 CaMKII 两端分别融合 CFP 和 YFP，用于在兔心室肌细胞中测量 CaMKII 激活状态。结果显示，Camui 及其缺失...
Development of the fluorescent biosensor hCalmodulin (hCaM)L39C-monobromobimane(mBBr)/V91C-mBBr, a novel tool for discovering new calmodulin inhibitors and detecting calcium.
本文构建了一种新型、敏感且特异的人钙调蛋白（hCaM）荧光生物传感器 hCaM L39C-mBBr/V91C-mBBr。该传感器可用于在溶液中检测具有相反荧光信号的配体，即钙离子（Ca2+）和钙调蛋白抑制剂。作者将该装置成功应用于分析 Ca2+ 对三氟哌嗪（TFP）结合 CaM 的变构效应：Ca2+ 的表观解离常数 Kd 为 0.2...
Fluorescence, circular dichroism, NMR, and docking studies of the interaction of the alkaloid malbrancheamide with calmodulin.
从真菌 Malbranchea aurantiaca 的生物碱部分，作者以较高收率分离得到新类似物 isomalbrancheamide B（3）及已知化合物 malbrancheamide（1）、isomalbrancheamide（2）和 premalbrancheamide（4）。采用酶学、荧光、圆二色、核磁共振和分子模拟方法...
Activation by Ca2+/calmodulin of an exogenous myosin light chain kinase in mouse arteries.
本研究利用表达外源肌球蛋白轻链激酶（MLCK）荧光共振能量转移（FRET）活性生物传感器的转基因小鼠，研究完整肠系膜动脉中 Ca2+/钙调蛋白（Ca2+/CaM）对 MLCK 的激活与调节。高外钾使细胞内 Ca2+（fura-2 比值或 fluo-4 荧光）和 MLCK FRET 比值均快速升至峰值后先快后慢下降；张力先出现相性峰值...
Signaling processes for initiating smooth muscle contraction upon neural stimulation.
本研究确定参与Ca2+/钙调蛋白（CaM）依赖性平滑肌肌球蛋白调节轻链（RLC）磷酸化的信号过程关系。作者在转基因小鼠平滑肌中表达基因编码生物传感器MLCK，实时测量神经刺激3 s的小鼠膀胱平滑肌条中[Ca2+]i、MLCK激活与张力。[Ca2+]i和激酶激活潜伏期分别为55±8 ms和65±6 ms，二者在100 ms随RLC磷酸...
An alternative assay to discover potential calmodulin inhibitors using a human fluorophore-labeled CaM protein.
本文报道了一种用于发现潜在钙调蛋白（CaM）抑制剂的荧光检测新方法。作者通过定点突变将人钙调蛋白第124位甲硫氨酸替换为半胱氨酸，获得 hCaM M124C，并经疏水交换层析和阳离子交换层析纯化。随后用硫醇反应性荧光探针单溴双咪胺（mBBr）共价修饰 Cys124，得到 hCaM M124C–mBBr。该标记蛋白在远紫外圆二色和 C...
A technique for simultaneous measurement of Ca2+, FRET fluorescence and force in intact mouse small arteries.
Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器分子是揭示细胞内特定分子相互作用的重要工具，但通常用于培养细胞，而培养细胞与完整机体中的细胞在基因表达和生理刺激/输出测量方面存在差异。本研究利用表达 FRET 型肌球蛋白轻链激酶（MLCK）生物传感器分子的转基因小鼠，报道了一种在完整、功能小鼠小动脉平滑肌细胞中动态观察 MLCK ...