贝类毒素（PbTxs）是强效海洋神经毒素，可致神经性贝类中毒（NSP），其环多醚结构在过去20年地理分布扩大。现有检测方法存在伦理问题和技术局限，亟需替代方法用于监管监测。本研究首次同时筛选针对PbTx-1和PbTx-2的DNA适配体，并以PbTx-1适配体为识别元件构建生物层干涉（BLI）生物传感器。通过体外筛选，从随机序列库中成...
生物传感器技术在基于片段的药物发现中日益重要。AAA+ ATP酶p97是维持蛋白稳态的关键蛋白，也是癌症化疗潜在靶点。现有p97抑制剂主要抑制其ATP酶活性，会全局干扰p97介导的多种过程；若通过蛋白-蛋白相互作用抑制剂阻断辅因子与N结构域结合，则可选择性调控特定功能。本文建立基于生物层干涉（BLI）的片段筛选方法，以p97 N结构...
近年来有害藻华频发，失忆性贝类毒素岩藻氨酸（domoic acid, DA）主要由假菱形藻产生，其检测需求日益迫切。适配体作为新型分子识别元件，为 DA 监测提供了清晰手段。本研究采用 Capture-SELEX 成功筛选 DA 适配体，经鉴定与截断优化获得高亲和、高特异性适配体 C1-d（KD 109 nM）。通过分子对接和分子动...
体内蛋白常以大型大分子复合物形式存在，其结合特异性与动态变化决定功能输出。本研究在生物层干涉（BLI）生物传感器表面组装并转化炭疽毒素前内体复合物。首先，将半胱氨酸突变的致死因子 N 端（LFN）通过二硫键以最佳取向偶联至 BLI 传感器，使保护性抗原前孔（PAprepore）结合，Kd 约 1 nM。取向优化的 LFN-PApre...
Octet 生物层干涉（BLI）生物传感器为表征抗体-抗原相互作用提供了高通量替代方案，可补充表面等离子共振（SPR）和 SPR 成像（SPRi）平台。然而，Octet 在准确、可重复测定单克隆抗体（mAb）结合速率常数时，常受分析物再结合和传质限制（MTL）影响。本研究针对上述问题，系统优化了 Octet HTX 上 mAb-抗原...
蛋白质折叠长期依赖溶液法，如溶解度、酶活、二级结构、FRET、NMR 和氢氘交换等，但快速分析常受聚集副反应影响。本文建立一种生物层干涉（BLI）分子伴侣检测系统，用于筛选变性蛋白的优良复性条件。通过监测无核苷酸高亲和 GroEL 与固定蛋白的结合，可实时反映固定蛋白随时间的折叠程度。GroEL 优先结合暴露疏水面的未折叠或部分折叠...
食品安全要求快速筛查低分子化学污染物，如生物毒素、药物残留和农药。现有食品污染物生物传感器多基于电化学、荧光或表面等离子共振，而生物层干涉（BLI）已在药物发现和生命科学中应用，正逐步用于食品污染物分析。本研究以膝痛酸（domoic acid, DA）为模型化合物，评估 BLI 生物传感器用于低分子食品污染物检测的可行性。通过同时建...
基于生物传感器的小分子片段筛选是药物发现中的有价值工具。与许多生化方法相比，该方法可通过检查结合谱和响应，将主要命中与非特异性或非理想相互作用区分开，从而降低假阳性率。生物层干涉（BLI）通过测量可见光从光学层和含感兴趣蛋白的生物层反射所产生的干涉图案变化来监测小分子相互作用，是一种较新的方法。BLI 采用浸入 96 孔或 384 ...
经典进行性骨化异常（FOP）中，骨形态发生蛋白I型受体激酶ALK2/ACVR1调控亚域的单一复发突变R206H导致异位骨化。该突变仅将一个精氨酸替换为组氨酸，而组氨酸在生理pH范围内可发生质子化，因此提出pH敏感开关机制，导致突变受体在配体非依赖条件下激活BMP信号。为检验该机制中FKBP12介导的激酶自抑制是否丧失，作者用纯化的野...