Rho家族GTP酶是细胞骨架动态的核心调控因子，其活性受鸟苷酸交换因子（RhoGEF）和GTP酶激活蛋白（RhoGAP）调控。本方案提供一套稳健、可高通量筛选的活细胞荧光共振能量转移（FRET）生物传感器检测流程，用于在天然细胞环境中分析RHOA、RAC1和CDC42等GTP酶活性变化。该传感器为遗传编码单链报告蛋白，包含循环置换m...
α-突触核蛋白（α-Syn）聚集驱动帕金森病（PD），但其自组装与结构转化的早期阶段尚未在神经元内被直接观察。本研究利用单分子 Förster 共振能量转移（smFRET）生物传感器追踪神经元内 α-Syn 的构象状态，发现 α-Syn 以浓度依赖和序列特异方式由单体转化为两种不同寡聚体状态。三维 FRET-关联光镜与电镜（FRET...
淀粉样蛋白β（Aβ）肽在神经元内产生，部分释放至脑实质，部分保留在胞内。由于抗Aβ抗体同时捕获Aβ及其前体蛋白APP和C99，胞内Aβ检测仍具挑战。作者此前开发了C99 720-670 FRET生物传感器用于记录γ-分泌酶活性，并建立了多重免疫染色平台，可在亚细胞分辨率下选择性检测胞内Aβ。利用这些方法，作者发现C99主要在晚期内体...
亨廷顿病（HD）是由亨廷顿蛋白（HTT）多聚谷氨酰胺扩展引起的神经退行性疾病，其早期突触功能障碍机制尚不清楚。本研究在 HD 纹状体细胞系、HD 小鼠模型及 HD 患者死后脑组织中均发现黏着斑激酶（FAK）基础活性显著降低，并利用基于 FRET 的 FAK 生物传感器观察到神经递质诱导的 FAK 激活在 HD 纹状体神经元中受损。全...
Förster共振能量转移（FRET）是荧光生物传感器中常用且理想的信号转导方式，具有高信噪比和可见信号。尽管已有大量工作通过优化生物分子提高检出限和动态范围，但染料的选择及其相对位置仍研究不足。本文采用实验与计算相结合的方法，系统比较有机荧光团（Cy5或Texas Red）与无机纳米颗粒（量子点，QD）的性质，以及FRET供体或受...
非精神活性大麻素大麻二酚（CBD）已获美国食品药品监督管理局批准用于两种耐药性癫痫，但治疗机制和副作用仍不清楚。本研究采用时间分辨多组学策略，系统分析 CBD 在人细胞系中的作用。基于 FRET 的生物传感器筛选显示，CBD 可迅速升高细胞质钙离子并激活 AMP 活化蛋白激酶（AMPK），该效应在人角质形成细胞和神经母细胞瘤细胞中均...
分子伴侣等质量控制机制可防止蛋白质错误折叠与聚集，但其在不同细胞区室中如何维持蛋白组折叠状态仍不清楚。本研究采用基于荧光共振能量转移（FRET）的策略，利用由原核核糖核酸酶 barnase 构建的“诱饵”生物传感器，检测人胚胎肾细胞 HEK293T 细胞核与细胞质中质量控制机制对错误折叠和聚集的保护能力。结果显示，barnase 生...
本文为PLOS ONE编辑部于2022年发布的撤稿声明，针对2010年发表的题为《A Femtomol Range FRET Biosensor Reports Exceedingly Low Levels of Cell Surface Furin: Implications for the Processing of Anthr...
神经元摄取并传播α-突触核蛋白（αS）、Tau和TDP-43等蛋白病理性种子可促进神经退行。多系统蛋白病（MSP）与VCP显性突变相关，患者出现肌肉和神经元退行，病理聚集可包含αS、Tau和TDP-43。本研究在αS FRET生物传感器细胞中进行基于荧光细胞分选的全基因组CRISPR-Cas9筛选，并用FRET/流式生物传感器或磷酸...
心力衰竭和心律失常的关键治疗靶点是肌浆网（SR）ryanodine受体2（RyR2）钙释放通道的病理性钙泄漏。作者此前通过监测RyR2与钙调蛋白（CaM）或生物传感器肽DPc10的结合，检测成人心肌细胞中病理性泄漏RyR2。本研究检验这些互补结合测量能否作为高通量筛选（HTS）方法，发现靶向泄漏RyR2的小分子。利用FRET，在模拟...
基因编码的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器可用于活细胞光学成像，但小构象变化常限制其动态范围。为此，作者开发了用于 Rac1 激活检测的 FRET 和镧基 FRET（LRET）生物传感器，具有两个增强敏感性和动态范围的关键特征。其一，α-螺旋 ER/K 连接子分隔 FRET 供体与受体，使 C 端活性 Rac1 ...
荧光生物传感器可在活单细胞内测量代谢物、小分子浓度以及 pH、分子拥挤等性质，但缺乏用于识别细胞并定量单细胞生物传感器信号的简便软件。本文开发了名为 FRETzel 的新软件包，以填补这一空白，并通过首次在不同大小单个脂肪细胞中测量胰岛素刺激的葡萄糖摄取来展示其应用。研究利用表达葡萄糖 FRET 纳米传感器的 3T3-L1 脂肪细胞...
在信号转导蛋白中，内在无序区常作为调控元件，对环境变化、配体结合和翻译后修饰敏感。无序区所采样的构象空间可受环境刺激影响，并通过效应结构域触发下游过程。这类调控元件的无序性使其能够整合信号并产生分级响应，但也阻碍了基于固定三维结构的传统药物筛选方法。作者设计了一种可遗传编码的生物传感器，用于检测 c-Src 激酶 N 端调控元件（S...
钙调蛋白（CaM）是 Ca2+ 感受蛋白，参与多种血管平滑肌细胞（VSMC）功能。由于 CaM 表达量不足以覆盖其众多靶蛋白，调控其表达及靶蛋白相互作用的因子可广泛影响血管功能。VSMC 接受内皮细胞（EC）的多种调控，但 EC 是否通过控制 VSMC 中 CaM 表达及相互作用调节血管功能尚不清楚。本研究使用同一血管分离的 EC ...
胰腺β细胞脉冲式胰岛素分泌对体内血糖精细调控至关重要。糖酵解振荡被认为是产生脉冲胰岛素分泌相关电振荡的机制。糖酵解酶6-磷酸果糖激酶-1（PFK）催化果糖-6-磷酸（F6P）生成果糖-1,6-二磷酸（FBP）。有假说认为胰岛中观察到的慢电和钙振荡（周期3–5 min）源于FBP对PFKM的变构反馈激活。胰腺β细胞表达PFKL、PFK...
转移是卵巢癌治疗的主要难题。本研究探讨 Cdc42 GTPase 激活蛋白 StarD13 在卵巢癌细胞运动、侵袭和侵袭足形成中的作用。免疫组化和 Oncomine 数据库分析显示 StarD13 在卵巢腺癌组织中较正常卵巢组织表达降低，提示其具有潜在肿瘤抑制功能。在 SKOV-3、Caov-3 和 PA-1 卵巢癌细胞中敲低 St...
植物激素赤霉素（GA）在豆科植物根瘤发育的不同阶段均不可或缺，其时空分布受到严格调控。转录组与生物信息学分析表明，多个编码 GA 合成与降解关键酶的基因对大豆（Glycine max）结瘤形成至关重要。作者检测了若干 GA 氧化酶基因的表达，并利用基于 Förster 共振能量转移（FRET）的 GA 生物传感器 GPS1，测定接种...
遗传编码荧光生物传感器可通过光学检测追踪活细胞和组织中的细胞内信号动态。许多此类传感器基于 Förster 共振能量转移（FRET）原理。本文详述了一种利用光纤光度计在活体动物中检测 FRET 型生物传感器信号的简单方法。将腺相关病毒（AAV）脑内注射以表达遗传编码 FRET 生物传感器，数周后利用光纤光度计实时记录自由移动成年大鼠...
组蛋白甲基化在染色质重塑和基因组调控中起关键作用，但缺乏能在活细胞中以高时空分辨率可视化这些组蛋白修饰的工具。我们开发了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的生物传感器，并将其整合到核小体中，用于监测活细胞中H3K27三甲基化（H3K27me3）。我们还发现，通过调节传感器内部连接肽可显著提高FRET生物传感器性能。改进后的传感器可...
溶质结合蛋白（SBP）在配体结合亲和力、热稳定性与构象变化之间形成平衡，可用于小分子运输、传感与趋化。尽管SBP的配体诱导构象变化使其适合作为生物传感器元件，但对其进行蛋白质工程改造难度较大。本研究通过理性设计与计算设计，将一种D-丙氨酸特异性SBP改造为对信号分子D-丝氨酸具有选择性的荧光传感器D-serFS。该传感器通过结合位点...