人类免疫缺陷病毒（HIV）包膜糖蛋白（Env）是开发保护性疫苗的主要靶标。Env 上广泛的 N-连接糖基化可能影响其效力、稳定性和表达产量，表达宿主会影响糖基化程度和类型。本研究报道了候选 C 亚型免疫原 CO6980v0c22 gp145（目前处于 I 期临床试验）在 CHO-K1 和 Expi293F 两种宿主细胞中生产的糖基化...
神经退行性疾病目前仍缺乏鉴别诊断和治愈手段。Tau蛋白是常见tau病（tauopathies）的生物标志物，参与微管与细胞结构稳定；但翻译后修饰可使其自组装为细胞毒性结构，并在细胞内外共定位，因此可作为蛋白病理与神经退行性疾病的可行生物标志物。本文报道一种用于tau441蛋白的新型光学生物传感器，基于适配体识别探针和生物层干涉（BL...
化合物与烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）的结合在生物医学研究中备受关注，但现有方法通量低、样品消耗大或受分类学限制。本文报道一种新型无标记生物层干涉（BLI）检测方法，结合经改造的模拟肽（mimotope），用于测量不同物种nAChR α亚基正构位点的配体结合。作者以广食性蛇（Acanthophis antarcticus）、鱼类专...
分枝杆菌感染引起的肺病仍是全球公共卫生问题。结核分枝杆菌复合群（MTBC）与非结核分枝杆菌（NTM）所致肺部疾病临床表现高度相似，快速区分二者对合理治疗至关重要。本研究旨在建立基于抗体的生物传感器系统，用于识别 MTBC 和 NTM 感染。作者制备并表征了特异性识别分枝杆菌 Ag85B 蛋白的单克隆抗体（mAb）。其中，抗 Ag85...
糖基化是受生物工艺参数和细胞生理状态影响的单克隆抗体重要质量属性。本研究开发了基于凝集素的生物层干涉（LBLI）方法，用于相对评估Fc糖基化免疫球蛋白G（IgG）的半乳糖基化和岩藻糖基化水平。在15 L生物反应器中改变工艺条件重组表达Fc糖基化IgG并收获产物，验证了LBLI对不同样品的可靠性、稳健性和适用性，并以液相色谱-质谱（L...
为并行分析数百至数千个分子相互作用，高通量生物传感系统被广泛发展。本研究采用成熟的凝血酶DNA适配体检测体系，比较三种无标记高通量成像系统（自研iRIf、bscreen SCORE和IBIS-MX96 SPRi）以及分析软件和操作人员的影响，并以Octet-RED96 BLI、Biacore3000 SPR和Monolith-NT....
利什曼病是由利什曼原虫引起的被忽视热带病，现有治疗药物有限且无疫苗。UDP-葡萄糖（UDP-Glc）和 UDP-半乳糖（UDP-Gal）的生物合成对原虫存活至关重要，受 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UGP）和 UDP-糖焦磷酸化酶（USP）控制。本研究以 L. major USP 为靶标，采用生物层干涉（BLI）技术筛选 965 个小...
体内蛋白常以大型大分子复合物形式存在，其结合特异性与动态变化决定功能输出。本研究在生物层干涉（BLI）生物传感器表面组装并转化炭疽毒素前内体复合物。首先，将半胱氨酸突变的致死因子 N 端（LFN）通过二硫键以最佳取向偶联至 BLI 传感器，使保护性抗原前孔（PAprepore）结合，Kd 约 1 nM。取向优化的 LFN-PApre...
淡水水体中节球藻素R（NOD-R）污染是重要的环境与公共健康问题。现有小鼠生物试验、HPLC、LC-MS、毛细管电泳及ELISA等方法存在伦理争议、耗时、昂贵或交叉反应等不足。本文以SELEX筛选的DNA适配体为特异性识别元件，构建了无标记生物层干涉（BLI）适配体传感器用于NOD-R检测。该传感器检测范围为40–600 nM，线性...
单克隆抗体（mAb）表位的表征对治疗性抗体、诊断工具和疫苗开发具有重要意义，也可为病原体感染或疫苗接种后抗体应答的序列库分析提供功能信息。然而，表位映射策略的发展滞后于 mAb 的发现。作者开发了一种定点突变方法，并与生物层干涉（BLI）生物传感器联用，用于映射 mAb 表位。通过构建流感 A 病毒重组血凝素（HA）和神经氨酸酶（N...
可溶性CD147（sCD147）是膜结合CD147的脱落形式，参与细胞功能调节，其在体液中的存在与多种疾病相关。本研究旨在建立抗体生物传感器，用于同时差异检测sCD147的一般型和截短型。作者将生物层干涉技术（BLItz）与特异性识别CD147不同胞外域的单克隆抗体（mAb）相结合，建立了基于抗体的生物传感器，以快速测量并表征sCD...
本研究评估了一种基于生物素化GroEL-链霉亲和素生物层干涉（GroEL-BLI）的自动化方法，用于检测多种药理学相关单克隆抗体（mAb）溶液中瞬时形成的前聚集体。利用该方法对IgG1和IgG4 mAb的聚集倾向进行排序，并对最不稳定IgG4 mAb施加高温、酸性pH及盐酸胍等应力。结果显示，GroEL-BLI主要在尺寸排阻色谱（S...
Octet 生物层干涉（BLI）生物传感器为表征抗体-抗原相互作用提供了高通量替代方案，可补充表面等离子共振（SPR）和 SPR 成像（SPRi）平台。然而，Octet 在准确、可重复测定单克隆抗体（mAb）结合速率常数时，常受分析物再结合和传质限制（MTL）影响。本研究针对上述问题，系统优化了 Octet HTX 上 mAb-抗原...
天然和合成类固醇激素广泛存在于环境中，即使低浓度也具有内分泌活性并危害健康。为检测环境类固醇激素，本文基于生物层干涉（BLI）原理开发了一种新型生物传感器系统。检测基于结合生物分子的光纤表面反射白光干涉图案变化，无需放射性、酶或荧光标记。将来自 Comamonas testosteroni 染色体DNA的两段含10 bp回文序列的双...
当前工业药物发现通常以候选药物库对靶标分子进行经验性筛选。相比平衡法，高通量动力学测量能够分别获得结合亲和力的各动力学组分。尽管仪器硬件提升了通量，数据处理仍存在三个瓶颈：现有商业分析模型未考虑导致体外生物物理质量差的分子固有性质；通过用户界面处理数据耗时且不利于并行采集；尚无商业方案能在动力学竞争分析中纳入历史动力学数据。本文提出...
非流动生物层干涉（BLI）已成为无标记、实时、高通量监测几乎所有生物分子相互作用的常用工具。需要测量脂质体与多种化合物相互作用动力学的高效筛选方法要求固定化脂质体。本文描述了一种用于相互作用研究的脂质体固定化方法，基于该生物传感器平台的生物物理原理。固定化方法包括装载含DSPE-PEG(2000)-生物素的空间稳定胶束（SSMs），...
流感血凝素抑制（HI）和病毒微量中和（MN）试验广泛用于血清流行病学研究，但现场便携性有限且难以完全自动化高通量检测。为此，作者利用重组血凝素（rHA）抗原，结合Chembio、Luminex和ForteBio三种平台，建立了三种流感亚型特异性抗体多重检测方法，并用一组特征明确的人血清评价其灵敏度、特异性和亚型交叉反应性。与传统HI...
本研究将生物层干涉（BLI）技术与酶联适配体竞争结合法相结合，建立了一种实时、超灵敏、快速定量检测海洋生物毒素河鲀毒素（palytoxin, PTX）的方法。以辣根过氧化物酶（HRP）标记的DNA适配体作为生物识别受体，与固定在传感器表面的PTX进行竞争性结合；随后将形成的PTX-HRP-适配体复合物浸入3,3'-二氨基联苯胺（DA...
通过外源配体结合稳定亚稳态或易聚集蛋白的折叠态，是降低蛋白折叠缺陷所致疾病病理的有吸引力策略。现有方法受蛋白聚集干扰而受限。本文报道一种基于 GroEL 分子伴侣的生物层干涉（BLI）变性剂脉冲平台，用于快速评估折叠蛋白的动力学稳定性并监测配体稳定效应，适用于内源稳定蛋白（单体、寡聚体、多结构域蛋白）和亚稳态蛋白（如低 Tm）。将目...
蛋白质折叠长期依赖溶液法，如溶解度、酶活、二级结构、FRET、NMR 和氢氘交换等，但快速分析常受聚集副反应影响。本文建立一种生物层干涉（BLI）分子伴侣检测系统，用于筛选变性蛋白的优良复性条件。通过监测无核苷酸高亲和 GroEL 与固定蛋白的结合，可实时反映固定蛋白随时间的折叠程度。GroEL 优先结合暴露疏水面的未折叠或部分折叠...