心室肌细胞中，β1-肾上腺素受体（β1-AR）激活可高效诱导正性肌力与正性舒张效应，而β2-肾上腺素受体（β2-AR）激活通常功能效应有限，这源于β2-AR来源cAMP依赖信号的区室化。本研究探讨富含胆固醇和caveolin-3（Cav-3）的小窝（caveolae）如何参与成年大鼠心室肌细胞中的区室化。选择性激活β2-AR（zin...
环磷酸腺苷（cAMP）是G蛋白偶联受体（GPCR）激活后信号转导的关键第二信使。研究Gs偶联受体时，需要一种能够连续监测cAMP浓度动力学变化并覆盖较宽动态范围的检测手段。为此，作者通过进化改造了一种cAMP发光生物传感器，使其更好地覆盖活细胞中存在的生理浓度范围。与免疫分析相比，进化后的生物传感器构型能够以更低劳动强度的格式准确追...
D1型多巴胺受体是中枢神经系统多巴胺能信号的主要介导者。激动剂激活后，D1受体可快速内化，但这一过程的功能意义长期不明。本研究在HEK293细胞和原代纹状体神经元中，利用实时荧光成像与FRET型cAMP生物传感器（Epac1-cAMPs），同步分析D1受体转运与cAMP积累动力学。结果显示，多巴胺或D1选择性激动剂SKF81297可...
cAMP 是调控胰岛 β 细胞胰岛素和 α 细胞胰高血糖素分泌的关键第二信使。分散 β 细胞可出现 cAMP 振荡，但完整胰岛内信号动力学尚不清楚。本研究利用全内反射显微镜（TIRF）和荧光转位生物传感器，记录完整小鼠胰岛外周 α 和 β 细胞质膜下 cAMP 浓度（[cAMP]pm），并依据肾上腺素的相反作用鉴定细胞类型。结果显示...
环磷酸腺苷（cAMP）调控多种生物学过程与细胞功能，其胞内空间梯度日益受到重视。既往研究表明，巨噬细胞吞噬过程中会产生cAMP，且cAMP水平升高会抑制促炎介质生成、吞噬和杀菌等宿主防御功能，但吞噬性巨噬细胞中cAMP生成的空间与动力学特征尚不清楚。本研究采用基于Förster共振能量转移（FRET）的cAMP生物传感器，在活巨噬细...
膜筏和小窝蛋白作为信号平台受到关注，尤其在 HIV、神经及心血管疾病发病机制中的作用。β-肾上腺素受体（β-AR）介导的环磷酸腺苷（cAMP）信号是膜筏研究重点，因为该通路多个组分被膜微区室化，但膜筏如何在细胞环境中调控信号动力学仍不清楚。本文报道一种基于单细胞实时荧光成像的活细胞检测方法，利用改进的 FRET 型 cAMP 生物传...
本文报道了一种高亲和力双底物荧光探针ARC-583（Adc-Ahx-(D-Arg)6-D-Lys(5-TAMRA)-NH2），并描述了其在荧光偏振/各向异性结合与置换实验中的应用，用于表征cAMP依赖性蛋白激酶PKA和Rho激酶ROCK的ATP竞争性抑制剂及蛋白/肽底物竞争性抑制剂。该探针与PKA的结合解离常数为0.48 nM，因而...
心肌细胞中部分受体激活可通过刺激cAMP产生调节蛋白激酶A（PKA）依赖反应，且cAMP产生可能局限于离散胞内区室。作者此前建立区室化cAMP信号计算模型，可重现β1肾上腺素能和M2毒蕈碱受体介导的cAMP变化发生在与PKA信号相关的微区室，但模型提示细胞大部分胞质cAMP浓度可能高于PKA信号区室。本研究使用由Epac2-camp...
痕量胺是一类神经递质，近年发现其可结合中枢神经系统中广泛表达的新型G蛋白偶联受体（GPCR）家族——痕量胺相关受体（TAAR）。人TAAR1在模型细胞中膜表达极差，严重限制其药理学表征。本研究显示，在人TAAR1 N端插入人α2-肾上腺素受体前9个氨基酸所形成的天冬酰胺糖基化位点，足以使其在HEK-293细胞质膜上表达，从而可用新型...
甲状腺刺激素（TSH）受体属于7次跨膜受体糖蛋白激素受体亚家族，主要表达于甲状腺滤泡细胞，受TSH激活后调控滤泡细胞生长与功能。重组TSH用于甲状腺癌诊断筛查，但目前尚无选择性小分子TSHR激动剂。为筛选新型TSHR激动剂，作者将商品化细胞基环磷酸腺苷（cAMP）检测法微型化至1536孔板。该检测使用稳定转染TSHR并共表达环核苷酸...