铵通过谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸合酶（GOGAT）的连续作用进入碳骨架。蓝细菌 Synechocystis sp. PCC 6803 的 GS I 活性受两个内在无序失活因子（IF）调控：65 残基 IF7 和 149 残基 IF17。本研究利用核磁共振（NMR）研究 IF7 与 IF17 的构象，并用 NMR 和生物层干涉（B...
生物层干涉（BLI）是一种利用光纤生物传感器对蛋白相互作用进行无标记实时监测的光学技术。本研究将Octet Red BLI系统的自动化、无微流控和在线监测优势与信号增强步骤相结合，建立了一种快速、高灵敏的免疫学检测方法，用于生物战剂检测。作为概念验证，作者选择两类生物威胁对象：蛋白毒素蓖麻毒素（ricin）和革兰阴性菌土拉弗朗西斯菌...
实时无标记抗体筛选系统因抗体发现平台产生大量纯化抗体和上清样品而日益重要，但生物传感器类型会显著影响动力学和表位分箱结果。本研究评估了ForteBio人源特异性Protein A（ProA）、抗人IgG定量（AHQ）、抗人Fc捕获（AHC）以及定制生物素化抗人Fc捕获（b-AHFc）传感器在纯化IgG和IgG上清中的装载能力、再生性...
细菌毒素或病毒进入细胞常需细胞表面结合与内吞，内体酸化诱导可溶性毒素有限展开/重折叠并插入膜。作者提出，通过理性固定可溶性毒素，使膜插入前的展开-重折叠转变朝向远离固定表面的方向进行，可在脂质胶束/前纳米盘存在下观察毒素膜插入复合物。以炭疽毒素保护抗原（PA）为例，将固定化的前孔形式在模型脂质膜（纳米盘）中转变、插入，并以膜溶解形式...
本文报道了一种基于分子伴侣GroEL的生物层干涉（BLI）检测方法，用于识别药理学相关蛋白的结构改变和/或聚集物种。研究首先优化了生物素化GroEL在链霉亲和素BLI传感器上的固定，并通过圆二色、ANS荧光、浊度和GFP重折叠实验证明天然与生物素化GroEL均保持稳定的结构和活性。以酸性成纤维细胞生长因子-1（FGF-1）为例，40...
针对特定抗原的抗体panel多样性可通过多种检测格式建立。传统表位分箱实验将纯化抗体两两检测：若两种抗体竞争结合同一抗原，则归入同一簇或箱；若不竞争，则归入不同簇。本文报道一种高通量检测，可直接对粗杂交瘤上清进行分组，无需抗体纯化；同时无需重组蛋白，因为检测在表达目标抗原的细胞上进行，因此可用于难以纯化的细胞表面蛋白。重链可变区（V...
炭疽保护性抗原（PA）前孔七聚体的第2结构域在内体酸化过程中发生展开与再折叠，形成可插入内体膜的约100 Å β桶状孔，并促进致死因子（LF）和/或水肿因子（EF）从内体向细胞质转位。作者构建了PA前孔与LF结合域LFN的固定化复合物，利用表面等离子共振（SPR）和生物层干涉（BLI）实时监测前孔向孔转变的动力学。当溶液pH从7.5...
食品安全要求快速筛查低分子化学污染物，如生物毒素、药物残留和农药。现有食品污染物生物传感器多基于电化学、荧光或表面等离子共振，而生物层干涉（BLI）已在药物发现和生命科学中应用，正逐步用于食品污染物分析。本研究以膝痛酸（domoic acid, DA）为模型化合物，评估 BLI 生物传感器用于低分子食品污染物检测的可行性。通过同时建...
近年来，生物传感器技术在生物分子相互作用研究中取得显著进展。生物层干涉（BLI）是由ForteBio开发的一种有前景的生物传感器平台，主要用于在科研和常规应用中定性及定量蛋白/蛋白相互作用。本文描述了一种基于该平台生物物理原理表征蛋白/脂质体结合相互作用的方法。研究采用三种不同脂质体配方和蛋白激素重组人促红细胞生成素（rh-Epo）...
为实现血糖连续监测，作者开发了一种植入式无标记光学传感器：将光纤探针置于注射器针头内部空腔中，并在探针尖端固定葡萄糖结合蛋白刀豆蛋白A（Concanavalin A, Con A）；针内加载化学偶联甘露糖的牛血清白蛋白（BSA-mannose）溶液，并用半透膜封闭。当传感器浸入葡萄糖样品时，葡萄糖小分子可自由透过半透膜，与针腔内的 ...
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）是由某些镰刀菌产生、可污染小麦、大麦和玉米的真菌毒素，影响动物健康与食品安全。为快速监测小麦中 DON，作者基于生物层干涉（BLI）原理开发了一种免疫传感器。通过采用一抗—胶体金偶联物（Ab-Au）对信号进行放大，传感器响应显著增强；且放大效应在小麦基质中明显高于缓冲液，提示基质成分可能参与增强。增强后的...
基于生物传感器的小分子片段筛选是药物发现中的有价值工具。与许多生化方法相比，该方法可通过检查结合谱和响应，将主要命中与非特异性或非理想相互作用区分开，从而降低假阳性率。生物层干涉（BLI）通过测量可见光从光学层和含感兴趣蛋白的生物层反射所产生的干涉图案变化来监测小分子相互作用，是一种较新的方法。BLI 采用浸入 96 孔或 384 ...
经典进行性骨化异常（FOP）中，骨形态发生蛋白I型受体激酶ALK2/ACVR1调控亚域的单一复发突变R206H导致异位骨化。该突变仅将一个精氨酸替换为组氨酸，而组氨酸在生理pH范围内可发生质子化，因此提出pH敏感开关机制，导致突变受体在配体非依赖条件下激活BMP信号。为检验该机制中FKBP12介导的激酶自抑制是否丧失，作者用纯化的野...
在2009年大流行H1N1流感暴发初期，血凝抑制（HI）和微量中和（MN）检测提供了人群交叉反应保护信息，但难以自动化、高通量且实验室间标准化困难。为此，本文报道一种无细胞、无标记的流感抗体生物传感器检测法（f-AbBA），用于流感研究和诊断。该方法利用重组血凝素（HA）与无标记生物层干涉（BLI）技术，实时测量HA与特异性抗HA抗...
本文展示了无标记实时光学生物传感器在竞争性结合实验中的应用，通过对抗体面板进行表位分箱。作者描述了三种实验取向，即串联阻断、预混阻断和经典夹心阻断，并分别在ForteBio Octet QK、Bio-Rad ProteOn XPR36和GE Healthcare Biacore 3000三个平台上完成。通过成对检测抗体是否相互阻断对...
本文评估了ForteBio Octet光学生物传感器在蛋白相互作用动力学与亲和力测定中的应用。Octet基于生物层干涉（BLI），使用一次性光纤传感器尖端，从开放振荡微孔板中直接取样，无需微流控。作者以抗CGRP单克隆抗体4901及其Fab片段为模型，比较Octet与Biacore 3000和ProteOn XPR36两种表面等离子...