本研究报道了通过哺乳动物细胞瞬时转染表达并纯化两种 Fcγ 受体胞外域 CD16a 和 CD64，用于开发单克隆抗体生产批次质量控制的定量检测方法。作者将带 C 端 His 标签的 CD16a 和 CD64 胞外域经 IMAC 和 SEC 纯化，以胺基偶联或抗 His 抗体定向捕获方式固定在 CM5 SPR 芯片表面，实时监测其与曲...
本研究制备并表征了一种高灵敏度、广谱特异性单克隆抗体，用于微囊藻毒素检测，并建立快速表面等离子共振（SPR）光学生物传感器免疫分析方法。该抗体交叉反应为：MC-LR 100%、MC-RR 108%、MC-YR 68%、MC-LA 69%、MC-LW 71%、MC-LF 68%、节球藻毒素 94%。将 MC-LR 共价固定于 CM5 ...
针对特定抗原的抗体panel多样性可通过多种检测格式建立。传统表位分箱实验将纯化抗体两两检测：若两种抗体竞争结合同一抗原，则归入同一簇或箱；若不竞争，则归入不同簇。本文报道一种高通量检测，可直接对粗杂交瘤上清进行分组，无需抗体纯化；同时无需重组蛋白，因为检测在表达目标抗原的细胞上进行，因此可用于难以纯化的细胞表面蛋白。重链可变区（V...
表面等离子共振（SPR）生物传感器已被广泛用于测量多种分子间相互作用，但用于细菌、病毒等较高阶生物实体，尤其是植物病毒的研究较少。本文报道了一种用于评价经济上重要的丝状马铃薯Y病毒（PVY）与单克隆抗体相互作用的SPR传感器芯片优化方法。不同PVY分离株可被预先固定在芯片表面的多克隆抗体高效、稳定地捕获，并在多次进样和再生步骤后保持...
炭疽杆菌是重要生物战剂。本研究采用表面等离子共振（SPR）技术通过检测保护性抗原（PA）间接检测炭疽杆菌。将抗 PA 单克隆抗体固定于羧甲基葡聚糖修饰金芯片，利用 SPR 和电化学阻抗谱原位表征抗原抗体相互作用。动力学评价得到平衡常数 KD 为 20 fM，最大结合容量 Bmax 为 18.74，吉布斯自由能变化 ΔG 为 -78....
单克隆抗体（抗人前列腺特异性抗原抗体，anti-hPSA）与其抗原（人前列腺特异性抗原，hPSA）之间的特异性识别在前列腺癌诊断及其他生物传感器应用中具有前景。然而，由于界面堆积和分子取向带来的空间位阻，实际结合效率通常很低。本研究采用光谱椭偏术（SE）和中子反射（NR）考察溶液 pH、盐浓度和表面化学对抗体吸附及后续抗原结合的影响...
Ch14.18 是靶向双唾液酸神经节苷脂 GD2 的鼠-人嵌合单克隆抗体，已在儿童高危神经母细胞瘤治疗中显示疗效。为应对工艺变更和制造放大带来的产品可比性问题，需对电荷异质性、糖基化谱、分子状态与聚集、Fcγ 受体结合亲和力及功能活性进行系统表征。本文报道了内部开发并确认的成像毛细管等电聚焦（imaged cIEF）用于电荷异质性，...
酪蛋白胶束是牛乳中由 αs1-、αs2-、β- 和 κ-酪蛋白及胶体磷酸钙组成的超分子胶体颗粒，但其表面四种酪蛋白的精确排布仍不清楚。本研究利用表面等离子共振（SPR）生物传感器，在实时、无标记条件下，系统监测 44 种分别识别 αs1-、αs2-、β- 和 κ-酪蛋白不同表位的单克隆抗体与酪蛋白胶束的结合。结果表明，四种酪蛋白均可...
霍乱是由摄入被污染食物或水引起的急性肠道传染病，流行和大流行霍乱仅与霍乱弧菌O1和O139血清群相关。传统培养鉴定耗时长，PCR检测需要专业设备和人员，难以在资源有限地区快速应用。本研究开发并评价了一种干试剂一步法侧流层析生物传感器，用于同时检测碱性蛋白胨水（APW）富集培养物中的霍乱弧菌O1和O139血清群。该试纸条以胶体金纳米颗...
实验室或现场检测炭疽的一种方法，是利用高亲和力和高特异性结合试剂检测炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）芽孢。作者从单克隆抗体库中筛选出对炭疽芽孢外膜蛋白BclA截短形式tBclA具有高亲和力的候选抗体A4D11。利用Biacore表面等离子共振生物传感器进行标准动力学和动力学滴定分析，显示该抗体对重组tBclA的亲...
识别抗体恒定区的亲和试剂在免疫技术中具有重要价值。本研究以小鼠IgG1（单克隆抗体的主要亚型）为目标，从10^11规模的组合核糖体展示Affibody文库中筛选新型结合分子。采用三种不同小鼠IgG1单克隆抗体作为交替靶标进行四轮筛选，获得具有广泛小鼠IgG1识别能力、解离常数处于低纳摩尔至低微摩尔范围的结合分子。其中Zmab25与链...
新蝶呤是细胞免疫的有价值生物标志物，与病毒感染、细菌感染、自身免疫、心血管、神经退行性和恶性疾病等多种病理状态相关。为快速多生物标志物诊断制备特异性抗新蝶呤抗体，作者合成了新型半抗原衍生物并将其偶联到载体蛋白上。经充分表征的偶联物用于免疫BALB/c小鼠和兔。所制备的单克隆抗体在直接和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）格式中分别达到...
本文首次报道了一种基于微悬臂梁的霍乱弧菌传感器。利用原子力显微镜（AFM）中的动态力显微镜（DFM）测量因细胞结合到微悬臂梁表面而引起的共振频率偏移。目标菌为食源性和水源性病原体霍乱弧菌O1。商用镀金AFM微悬臂梁通过自组装单分子层（SAM）法固定抗V. cholerae O1单克隆抗体。在1×10^3至1×10^7 CFU/mL浓...
本文报道一种超灵敏、可一次性使用的阻抗式皮质醇生物传感器。将皮质醇特异性单克隆抗体C-Mab通过酰胺键共价固定于经双硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)DTSP自组装单分子层修饰的互指微电极IDmE表面；抗体结合后，用乙醇胺和甘氨酸混合液封闭未反应活性基团。将一次性传感器暴露于不同浓度皮质醇溶液，采用无标记电化学阻抗谱EIS测定皮质醇浓度。...
KLK1（组织激肽释放酶1）是组织激肽释放酶家族丝氨酸蛋白酶成员，也是人呼吸道中主要的激肽生成酶。DX-2300是一种全人源单克隆抗体，通过竞争性抑制机制抑制KLK1（Ki=0.13 nM）。在表面等离子共振（SPR）生物传感器检测中，当KLK1与已知活性位点抑制剂形成复合物时，未观察到DX-2300与KLK1结合，提示DX-230...
奥卡达酸（OA）及其结构类似物膝沟藻毒素-1（DTX-1）和DTX-2是脂溶性海洋生物毒素，可在贝类中富集并引起腹泻性贝类中毒。现行法定参考方法为小鼠生物测定法，但存在伦理争议，且灵敏度和特异性有限。替代方法应快速、稳健、经济、特异且灵敏。已有免疫检测方法灵敏度较好，但通常不能同时检测所有贡献污染的OA类毒素，也不能按各毒素的相对毒...
高致病性禽流感H5N1亚型病毒已造成家禽严重损失并导致人类散发感染，存在大流行风险，快速诊断与监测至关重要。本研究报道基于H5和N1特异性单克隆抗体（MAbs）的抗原捕获酶联免疫吸附试验（AC-ELISA），用于快速检测H5N1病毒。H5血凝素（HA）特异性抗体2D9识别构象表位，可识别0、1、2.1、2.2、2.3、4、7和8等多...
本研究首次将表面等离子共振（SPR）技术用于炭疽杆菌芽孢（Bacillus anthracis spores）的快速、灵敏、无标记检测。作者采用Biacore 3000 SPR生物传感器和抗炭疽芽孢单克隆抗体mAb 8G3，通过减法抑制法（subtractive inhibition assay）检测完整芽孢。先将mAb 8G3与不...
人源 HIV-1 单克隆抗体 2F5 识别核心序列 ELDKWA，4E10 识别核心序列 NWFNIT，二者是 HIV-1 疫苗免疫原设计的有前景模型。然而，这些识别域单独免疫难以诱导广谱中和抗体，且相关抗体可能具有膜结合特性，提示高效免疫原可能需要膜组分等额外识别基序。本研究采用源自 gp41 天然序列、同时包含 2F5 和 4E...
为降低橄榄油中掺入榛果油造成的经济损失和过敏风险，作者开发了一种基于高特异性抗榛果单克隆抗体的快速直接生物传感器免疫分析方法。该方法利用 BIACORE 3000 表面等离子共振平台，将单克隆抗体 MAb 50-5H9 固定于 CM5 芯片测量通道，并在参考通道固定抗花生单克隆抗体 MAb 51-12D2 以扣除非特异结合。橄榄油样...