中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）可引起重症肺炎且病死率超过50%，目前尚无有效抗病毒药物。为快速鉴定MERS-CoV复制抑制剂，作者表达MERS-CoV木瓜样蛋白酶（PLpro）和3C样蛋白酶（3CLpro），并建立基于荧光素酶的生物传感器以监测细胞内蛋白酶活性。结果显示，MERS-CoV PLpro可识别并切割生物传感器...
5′-多聚核苷酸激酶是一类关键酶，可催化具有5′-羟基末端的核酸磷酸化，参与DNA损伤修复等细胞事件。T4多聚核苷酸激酶（PNK）在细胞核酸代谢和DNA损伤应答中发挥重要作用，其活性与抑制状态影响核酸调控。本文报道一种新型纳米通道生物传感器，用于监测PNK的活性与抑制。该传感器基于功能化纳米通道系统和λ外切酶偶联切割反应：生物素标记...
DNA甲基化是重要的表观遗传事件，参与转录调控、基因组印记和细胞分化，异常甲基化与多种疾病相关。甲基结合域（MBD）蛋白可特异性结合甲基化CpG二核苷酸。传统DNA甲基化检测通常需要亚硫酸氢盐处理、甲基化核苷酸标记或PCR扩增。本文基于MBD蛋白和考马斯亮蓝G250（CBB-G250）构建了一种新型电化学生物传感器，用于检测DNA甲...
本文报道一种新型电化学生物传感器，用于DNA甲基转移酶（MTase）活性及其抑制剂检测。该传感器基于甲基化敏感切割激活引物，随后由末端转移酶（TdTase）介导生物素化dUTP延伸，并通过酶促放大实现敏感检测。以DNA腺嘌呤甲基转移酶（Dam MTase）为模型，3'-巯基发夹DNA探针自组装于金电极表面作为底物；Dam MTase...
全球约有1.7亿人感染丙型肝炎病毒（HCV），可引发慢性肝炎、肝硬化等严重肝病。检测HCV病毒蛋白对诊断和监测具有重要意义，但现有基于抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）存在早期感染难以检出、假阳性或假阴性等局限。为克服上述瓶颈，RNA适配体作为抗体替代物被用于生物传感器检测病毒蛋白。本研究建立了一种基于链霉亲和素-生物素偶联的RN...
环二鸟苷酸（c-di-GMP）是细菌中调控毒力表达、生物膜形成等过程的重要第二信使，其胞内水平由 GGDEF 结构域二鸟苷酸环化酶（DGC）合成和 EAL/HD-GYP 结构域磷酸二酯酶（PDE）降解共同控制。目前体外检测 DGC/PDE 酶活多依赖放射性标记 c-di-GMP 或 HPLC，操作复杂且通量低。本文基于铜绿假单胞菌 ...
本文报道了一种用于测定蛋白酪氨酸激酶（PTK）活性的新型无标记电化学方法。以与多种实体瘤相关的表皮生长因子受体（EGFR）为模型激酶，将EGFR底物poly(glu, tyr)(4:1)多肽通过硅烷化学共价固定于氧化铟锡（ITO）电极表面。多肽中的酪氨酸（Tyr）残基作为电化学信号报告基团，其伏安电流可被溶解态电子媒介体Os(bpy...
本研究开发了一种基于表面等离子共振（SPR）的生物传感器检测方法，用于在重建脂质膜环境中分析膜嵌入的全长β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1（BACE1，又称β-分泌酶），该酶是阿尔茨海默病的重要药物靶点。全长BACE1在Sf9细胞中表达，细胞裂解液中的酶通过识别C端His6标签的单克隆抗体直接捕获到SPR芯片表面，随后利用脑脂质提取物在...
本文报道了一种以金纳米颗粒（Au NPs）为信号转导探针的电化学发光（ECL）生物传感器，用于蛋白激酶活性与抑制分析。半胱氨酸终止的 kemptide 通过 Au-S 键固定于金电极表面，巯基乙酸封闭非特异性位点。在硫代三磷酸腺苷（ATP-γ-S）存在下，蛋白激酶A（PKA）催化 kemptide 磷酸化，在丝氨酸残基引入硫代磷酸基...
拓扑异构酶 I（TopI）反应中间体是由酶与切口 DNA 共价连接形成的 TopI-DNA 复合物，可被抑制剂捕获并导致再连接失败。表面等离子共振（SPR）已用于 TopI 抑制研究，但多数方法将小分子或短序列核苷酸固定于芯片，而将 TopI 作为流动分析物。本研究建立了一种将 TopI 蛋白固定于 SPR 芯片的无标记检测方法，并...
核糖核苷酸还原酶（RNR）负责合成 DNA 复制与修复所需的脱氧核糖核苷酸，其活性受核苷酸对调节位点差异亲和性的复杂变构调控。作者开发了一种稳健且灵敏的方法，通过 30.5 Å 连接臂将生物素化 RNR 偶联到表面等离子共振（SPR）链霉亲和素生物传感器芯片上。对三种 RNR 的系统研究表明，效应核苷酸可增强全酶亚基间相互作用，而底...
我们开发了一种基于阵列的光谱表面等离子共振（SPR）生物传感器检测系统，用于高通量分析基质金属蛋白酶（MMP）-3 活性。通过在胺修饰金阵列上固定 MMP-3 底物明胶制备明胶阵列，并通过监测明胶蛋白水解引起的 SPR 波长偏移来测定 MMP-3 活性。SPR 光谱、原子力显微镜和荧光蛋白阵列验证了 MMP-3 的明胶酶活性，该活性...
整合素是参与血管生成并在多种肿瘤中高表达的异二聚体细胞表面受体，其RGD识别位点是设计αvβ3抑制剂的重要结构基础。本研究采用表面等离子共振（SPR）生物传感器技术和分子对接模拟，系统考察多种环肽抑制剂与整合素αvβ3的结合特征。实验使用Biacore X100仪器和CM5芯片，通过NHS/EDC活化与氨基偶联将整合素αvβ3固定于...
实时检测细胞内病毒复制仍是研究难点。Epic系统是一种高通量、无标记光学检测平台，既能用于生化分析中的分子相互作用测量，也能通过细胞动态质量重分布（DMR）测量细胞整体响应。DMR此前已用于受体刺激后的细胞信号研究。本文首次报道利用Epic系统测量病毒复制诱导的细胞响应，证明该平台不仅能灵敏、定量地检测细胞内病毒复制，还可用于病毒抑...
丙型肝炎病毒（HCV）NS3/4A 蛋白酶在病毒复制中起关键作用。本研究报道了一种用于在单个活哺乳动物细胞中监测该酶活性的荧光共振能量转移（FRET）探针。该探针由增强青色荧光蛋白（ECFP）与 citrine（增强黄色荧光蛋白变体）融合而成，二者之间的连接肽中嵌入 HCV NS3/4A 蛋白酶切割位点。在哺乳动物细胞中表达该生物传...