Biacore analysis with stabilized G-protein-coupled receptors.
本研究采用经点突变稳定化的β1肾上腺素受体(β1AR*)和人源A2A腺苷受体(A2AR*),利用Biacore表面等离子共振(SPR)生物传感器实时监测受体活性,并表征一系列小分子拮抗剂的结合常数,亲和力跨度超过20,000倍。作者进一步展示了一种改进的His标签受体固定方法:将受体先捕获于Ni2+负载的NTA(羧甲基葡聚糖预固定亚...
本研究采用经点突变稳定化的β1肾上腺素受体(β1AR*)和人源A2A腺苷受体(A2AR*),利用Biacore表面等离子共振(SPR)生物传感器实时监测受体活性,并表征一系列小分子拮抗剂的结合常数,亲和力跨度超过20,000倍。作者进一步展示了一种改进的His标签受体固定方法:将受体先捕获于Ni2+负载的NTA(羧甲基葡聚糖预固定亚...
牛乳腺炎是奶牛业重大挑战,早期诊断对降低产量损失、提高奶质和控制成本至关重要。N-乙酰-β-D-氨基己糖苷酶(NAGase)在乳腺炎症时释放入奶,可作为乳腺炎早期指标。本文从人源Tomlinson单链可变片段(scFv)抗体文库中筛选抗NAGase scFv,并将其用于自动化光学生物传感器免疫分析以检测牛奶中NAGase。经噬菌体展...
本文报道了一种利用抗体–碳纳米管(CNT)偶联物放大表面等离子共振(SPR)免疫分析信号的方法。以人促红细胞生成素(EPO)和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)为模型,采用夹心免疫分析在 SPR 生物传感器上进行检测。为放大 SPR 信号,将多克隆抗体与 CNT 偶联,再使其与固定于芯片上的捕获抗体所结合的目标蛋白反应。...
原子力显微镜(AFM)可可视化并计数多蛋白体系中的单个蛋白及其复合物;光学生物传感器(OB)可提供复合物形成动力学、寿命(τLT)和亲和力。将τLT与催化循环时间(τcat)比较,可区分有效与非有效复合物。本文综述AFM与OB在细胞色素P450 101、P450 11A1和P450 2B4三种单加氧酶体系中的应用。AFM在三个体系中...
本文以能特异性结合23S rRNA靶位点的核糖体蛋白L1为模型,研究蛋白表面接触区形状互补性改变对蛋白–RNA亲和力的影响。作者将普遍保守的Thr–Met–Gly三联体中参与RNA识别的Thr217分别替换为Phe、Val和Ala,并测定了TthL1d1 Thr217Val突变体的晶体结构,与野生型及此前报道的突变体结构进行比较。利...
Citropin 1.1、maculatin 1.1 和 caerin 1.1 是源自澳大利亚树蛙 Litoria 皮肤腺的短链阳离子抗菌肽。为阐明肽结构与抗菌及溶血活性的关系,作者合成了若干类似物,并利用表面等离子共振(SPR)生物传感器结合脂质囊泡捕获芯片,研究这些肽及其类似物对 1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸甘油(D...
本文报道一种基于链霉亲和素–寡核苷酸(SON)复合物放大和表面等离子共振(SPR)生物传感器技术检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。目标DNA的一部分与预先在溶液相中形成的、含生物素化探针A(PA)的SON复合物结合,另一部分与固定在传感器表面的DNA探针B(PB)识别。通过优化SON复合物组成、探针设计和检测温度,实现高特异性和高...
基于片段的药物发现是发现候选药物的有效策略。然而,片段化合物亲和力弱,需要核磁共振(NMR)或X射线晶体学等高灵敏度生物物理技术来鉴定活性片段,因此筛选小片段库的优势部分被生物物理分析的高成本抵消。本文报道了一种基于表面等离子共振(SPR)生物传感器的片段筛选方法。为降低假阳性检出率,作者提出一种将多重参考扣除与配体效率相结合的数据...
本研究开发并验证了一种基于表面等离子共振(SPR)生物传感器的快速筛查方法,用于检测杜兰小麦、小麦制品和玉米基婴儿食品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。该方法以抗DON小鼠单克隆抗体为识别元件,采用竞争式免疫分析,每样品分析时间约9 min。单实验室验证结果显示,小麦、小麦基早餐谷物和玉米基婴儿食品的检出限(LOD)分别为57、9和...
生物传感器已被广泛用于测定结合与解离动力学,以及蛋白-配体、蛋白-蛋白或核酸杂交等相互作用。现有多种生物传感器,各自具有实际或被认为的优势。本文综述了四种已商品化光学生物传感器的基本理论与工作构型:表面等离子共振(SPR)、共振镜(RM)、共振波导光栅(RWG)和双偏振干涉(DPI)。文章结合近年已发表文献中的实验与结果,讨论了这些...
本文提出一种适用于水环境的平面波导双通道表面等离子共振(SPR)生物传感器,并通过本征模求解器结合完美匹配层(PML)进行理论仿真。器件由输入/输出波导段、中间连接段和两个活性区域组成,通道A采用金(Au)膜,通道B采用银(Ag)膜并覆盖保护/调谐层。作者证明该结构可通过选择材料与结构参数配置为多分析物检测模式或自参考模式:多分析物...
微小核糖核酸(miRNA)与多种调控功能及疾病(如癌症和心脏病)相关,是未来医学诊断的重要检测对象。本文报道了一种基于表面等离子共振(SPR)传感技术和 DNA-RNA 抗体检测体系的快速、灵敏 miRNA 检测与定量方法。该方法采用一种新型高性能便携式 SPR 传感器,其基于表面等离子体耦合与分散器(SPRCD)衍射光栅进行表面等...
本文报道了一种用于检测生物基质和食品中低浓度四环素类化合物的新型多西环素衍生物及其表面等离子共振(SPR)竞争法应用。针对小分子分析物难以直接检测的问题,作者采用间接竞争格式,以细菌四环素依赖调节蛋白 TetR 作为高亲和识别元件(Ka 约 10^9 M^-1)。通过 C9 位修饰合成三种不同烷基间隔臂长度的多西环素衍生物 DOX-...
表面等离子共振(SPR)光谱可用于热力学表征肽-表面相互作用,但其应用受限于能在金属生物传感器基底上形成均匀纳米薄层的表面类型。原子力显微镜(AFM)可用于任何微观平坦表面,因而更具普适性,但力谱数据解释常受探针尖端肽分子密度不确定性的影响。若标准化 AFM 方法测得的脱附力能与 SPR 测得的吸附自由能建立关联,则可将 AFM 方...
糖蛋白相互作用检测常需将凝集素或糖链固定于表面,表面等离子共振(SPR)是常用方法。本文报道利用 Staudinger 偶联将碳水化合物表位固定到 SPR 生物传感器表面。首先用 EDCI/NHS 活化 CM5 羧甲基葡聚糖芯片,经乙二胺(EDA)胺化后与叠氮乙酸-NHS 酯反应,生成稳定叠氮化表面;随后注入膦修饰糖配体,通过 St...
本文表明,长程表面等离子体(LRSP)可在一种物理不对称薄膜结构中支持:低折射率介质位于金属薄板上方,金属薄板由高折射率介质膜支撑并悬置于空气之上,构成悬空波导。为便于设计,作者在一维模型中推导解析公式,得到超越方程,通过约束金属薄板与介质膜厚度,使 LRSP 在金属薄板内的横向场保持对称。该公式结果与由水-金-二氧化硅-空气构成的...
本研究针对基于银基底的表面等离子共振(SPR)成像生物传感器进行理论分析,旨在说明尽管银化学稳定性较差,仍可用于生物分子相互作用的高灵敏检测。计算表明,银膜氧化会形成氧化银(Ag2O)层,使SPR曲线变宽、共振处最小反射率变浅,从而降低灵敏度;目标分析物结合引起局部折射率变化时,也会通过共振角位移和曲线展宽影响成像灵敏度。为克服银氧...
环孢素A(CypA)是抗逆转录病毒治疗的潜在靶点,抑制CypA可抑制HIV-1复制,但其调控HIV-1感染性的机制仍不清楚。HIV-1病毒蛋白R(Vpr)与CypA在体外和体内均可相互作用,但CypA与Vpr N端Pro-35相互作用的性质尚未明确。本研究结合核磁共振(NMR)交换光谱和表面等离子共振(SPR)光谱,表征人CypA与...
本文报道了一种用于人尿中疾病标志物与校准物质同步检测的单芯片生物传感器。该传感器基于电化学表面等离子共振(electrochemical SPR)方法,采用宽2 mm、深20 μm的PDMS微通道,并集成两个金膜传感区:一个金膜经10-CDT(10-羧基癸硫醇)和EDC/NHS固定抗转铁蛋白抗体,用于捕获转铁蛋白;另一个金膜涂覆Os...
MG7-Ag 是胃癌特异性肿瘤相关抗原,可作为胃癌早期诊断标志物。本研究建立基于表面等离子共振(SPR)的无标记免疫传感方法,用于检测胃癌患者血清中的 MG7-Ag。将特异性单克隆抗体 MG7-Ab 固定于 SPR 传感芯片表面,作为捕获和识别受体;当含 MG7-Ag 的人血清流过芯片时,抗原与抗体特异性结合,引起金膜界面折射率变化...