本文报道了一种用于阿片类物质的新型全电子生物传感器。该传感器由经计算重设计、具有水溶性和稳定性的工程化 μ-阿片受体（MUR）蛋白与石墨烯场效应晶体管（GFET）共价连接构成，利用晶体管电学响应读出配体结合事件。研究采用化学气相沉积制备大面积单层石墨烯，并开发阴影掩模图案化转移工艺，避免传统光刻污染，批量制备数百个 GFET 阵列，...
本研究将荧光激活蛋白（FAP）技术与高通量流式细胞术（HTFC）相结合，用于在活细胞中实时检测蛋白向质膜转运及从质膜回收的过程。该平台可支持转运受体（如G蛋白偶联受体、受体酪氨酸激酶和离子通道）的药物发现，弥补了传统流式细胞术高通量筛选的不足。作者以β2肾上腺素能受体（β2AR）体系验证方法，并扩展至其他G蛋白偶联受体。对约1200...
本研究开发了一种基于表面等离子共振（SPR）的无标记活细胞生物传感器，用于G蛋白偶联受体（GPCR）配体结合功能检测，并通过细胞内信号增强提高灵敏度。以β2-肾上腺素受体为模型，将其异源表达于人胚胎肾细胞（HEK-293）质膜上，利用SPR实时监测受体与配体结合引发的细胞膜附近折射率变化。结果表明，表达β2-肾上腺素受体的细胞对异丙...
神经紧张素受体1（NTSR1）是G蛋白偶联受体（GPCR）家族成员，其天然配体神经紧张素（NT）是中枢神经系统神经调节肽，并参与多种致癌过程，因此NTSR1是医药与治疗领域的重要分子靶点。本研究构建了一种基于荧光报告的微生物酵母生物传感器，用于监测人NTSR1信号对其激动剂的激活。为提高传感器灵敏度，作者对携带GFP报告基因的酵母菌...
本文报道了一种用于测量 m1 毒蕈碱胆碱能受体（m1 AChR）激动剂激活的荧光生物传感器的设计、构建与验证。m1 AChR 是典型的 I 类 Gq 偶联受体。该传感器采用通用 FRET 设计：以循环置换的 CFP 突变体为供体，以可特异性反应荧光素 FlAsH 为受体；当完全激动剂结合时，FRET 信号降低 15%–20%。重要的...
G蛋白偶联受体（GPCR）二聚化显著影响受体信号多样性，二聚体亚基间的变构通讯可改变配体结合、受体构象及与不同效应蛋白的相互作用。本研究在CHO细胞中瞬时表达野生型和突变型1型血管紧张素受体（AT1R）同源二聚体，研究其亚基间变构相互作用。实验通过选择性刺激一个亚基，监测另一亚基的β-arrestin2结合和构象变化。β-arres...
表面等离子共振（SPR）是一种快速、高效、经济且准确的生物物理片段筛选方法。SPR 越来越多地被用作二级检测，以验证由其他方法发现的片段命中物。近年来，技术进步使 SPR 逐渐发展为片段导向药物发现中的一级筛选技术。此外，SPR 生物传感器检测体系可针对多种蛋白建立，包括 G 蛋白偶联受体等膜蛋白。本综述讨论 SPR 片段筛选的优势...
在膳食成分中，共轭亚油酸（CLAs）因可减少脂肪储存并增加肌肉量而受到关注，但其对葡萄糖稳态的作用机制仍不清楚。本研究证明，CLAs 可特异性激活细胞表面受体 FFA1（GPR40），该受体是治疗 2 型糖尿病的新兴靶点。作者利用稳定表达 FFA1 的多种重组细胞体系，以及包括无标签、非侵入性动态质量重分布（DMR）技术（Corni...
传统上，G蛋白偶联受体（GPCR）被配体激活后产生特定下游反应，如G蛋白激活、腺苷酸环化酶调控、磷脂酶C激活或钙流改变。配体导向信号理论认为，作用于同一受体的不同配体可诱导不同下游效应，使筛选方法选择复杂。动态质量重分布（DMR）是一种无标记技术，利用光测量生物传感器附近细胞质量变化，提供包含多条通路和细胞事件的整合细胞响应。本研究...
本研究采用经点突变稳定化的β1肾上腺素受体（β1AR*）和人源A2A腺苷受体（A2AR*），利用Biacore表面等离子共振（SPR）生物传感器实时监测受体活性，并表征一系列小分子拮抗剂的结合常数，亲和力跨度超过20,000倍。作者进一步展示了一种改进的His标签受体固定方法：将受体先捕获于Ni2+负载的NTA（羧甲基葡聚糖预固定亚...
表面等离子共振（SPR）光谱可实时研究蛋白质相互作用动力学，但将其应用于 G 蛋白偶联受体（GPCR）时，受限于受体表达量低以及天然构象对疏水跨膜脂质环境的强烈依赖。本文比较了三种将视紫红质（rhodopsin, Rho）固定于传感器芯片表面的策略，分别采用凝集素 ConA 和针对不同末端位点的抗体进行受体捕获。通过系统考察 pH ...
配体依赖性受体内化是 G 蛋白偶联受体（GPCR）信号脱敏的重要机制。传统下游报告基因或第二信使检测易受脱靶效应影响，而 GFP 融合蛋白虽可直接标记受体，但单细胞荧光强度不随响应变化，不适合基于信号强度的高通量筛选。本文报道一种基于荧光激活蛋白（FAP）技术的活细胞生物传感器，用于检测人 β2 肾上腺素能受体（b2AR）的内化。作...
G蛋白偶联受体视紫红质是七次跨膜螺旋受体的经典范例，它可被光激发并将光信号传递至G蛋白介导的级联反应。该受体触发级联中的许多组分可从天然来源以天然形式纯化，因而非常适合生物物理研究。细胞信号转导研究的核心在于定量理解蛋白质-蛋白质相互作用。表面等离子共振（SPR）光谱是一种基于生物传感器的技术，可通过测定动力学参数研究分子相互作用。...
活细胞光学传感利用无标记光学生物传感器，在传感器传感体积内非侵入地测量活细胞受刺激后发生的动态质量重分布（DMR）。所得 DMR 信号是一种整合性细胞应答，反映刺激通过其作用的细胞靶点所介导的细胞信号转导。本文综述了活细胞光学传感在细胞生物学和配体药理学研究中的应用，重点介绍共振波导光栅（RWG）生物传感器细胞检测在高通量筛选中的应...
在基础研究和药物发现中，通过G蛋白偶联受体（GPCR）实现通路选择性的胞内信号转导，已成为精确调控细胞功能的新策略。GPCR在信号转导上常具有多效性，即内源性递质或外源性药物刺激受体后可同时激活多条胞内生化通路。本研究考察了一类新型GPCR激活剂的信号行为，该类化合物被设计为同时结合毒蕈碱型乙酰胆碱受体的正构递质结合位点和别构位点。...
本文报道了一种双联无标记光学生物传感器细胞检测法，用于在 A431 细胞中同时检测两个内源 G 蛋白偶联受体：Gq 偶联的组胺 H1 受体（H1R）和 Gs 偶联的 β2 肾上腺素受体（β2AR）。检测分为两步：首先使用 Sigma LOPAC 化合物库进行激动剂筛选，随后用含 H1R 激动剂组胺和 β2AR 激动剂肾上腺素的混合溶...
Epic细胞检测技术（Corning Epic）采用共振波导光栅（RWG）光学生物传感器，通过测量细胞内容物动态质量重分布（DMR）来检测细胞对配体的响应。该DMR测量是一种无创、无标记方法，可用于评价化合物的药理学性质。本研究在384孔微孔板中，利用Corning Epic系统对12种化合物在两种重组表达G蛋白偶联受体（GPCR）...