片段命中化合物向高亲和力先导化合物的优化是片段药物发现（FBDD）的关键环节。本研究通过片段生长策略，将苯甲酸酯取代去托品片段优化至乙酰胆碱结合蛋白（AChBP）结合位点中由配体诱导形成的亚口袋。AChBP 是半胱氨酸环受体配体结合域的可溶性同源蛋白。作者利用配体复合物 X 射线晶体结构、表面等离子共振（SPR）生物传感器分析和等温...
实验室或现场检测炭疽的一种方法，是利用高亲和力和高特异性结合试剂检测炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）芽孢。作者从单克隆抗体库中筛选出对炭疽芽孢外膜蛋白BclA截短形式tBclA具有高亲和力的候选抗体A4D11。利用Biacore表面等离子共振生物传感器进行标准动力学和动力学滴定分析，显示该抗体对重组tBclA的亲...
本文报道了一种膜蛋白阵列，可在结合免疫球蛋白 G（IgG）恒定区的同时，使可变区保持自由以结合抗原。该阵列支架为大肠杆菌外膜蛋白 A（OmpA）的跨膜域 tOmpA，经工程化改造后通过单个半胱氨酸残基在金表面组装成取向单层；其他蛋白结构域可融合到支架的 N 端和 C 端。本研究采用循环置换的 ctOmpA 融合两个金黄色葡萄球菌蛋白...
本研究旨在利用钛表面等离子共振（SPR）生物传感器测量合成RGDS(PO3H2)PA（P-RGD）肽与钛表面之间随时间变化的化学相互作用，并确定肽在表面的固定程度。采用基于Knoll方法的“单点”SPR仪器，以He-Ne激光实现生物分子吸附的纳米级检测。结果表明，氧化钛表面在接触pH≤2.0的H3PO4溶液时发生蚀刻；pH 1.9时...
表面-体积反应广泛存在于生物与工业过程，其动力学参数对理解分子相互作用至关重要。为实时、无扰动地测量结合与解离速率常数，Flexchip 和 dotLab 等光学生物传感器被开发出来。这类传感器在单一微流控通道内设置多个反应区，可同时监测相同或不同反应，因而也可作为细胞膜等多反应区生化系统的模型。正确描述此类系统必须同时考虑对流-扩...
本研究利用表面等离子共振（SPR）技术，考察蜂毒肽 melittin 及其 C 端截短类似物 21Q 与多种磷脂双分子层模型膜的结合行为。模型膜包括两性离子型二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）和二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺（DMPE），以及 DMPC/二肉豆蔻酰磷脂酰甘油（DMPG）、DMPC/DMPG/胆固醇和 DMPE/DMPG 混合物...
本研究利用表面等离子共振（SPR）生物传感器技术，对固定化全长丙型肝炎病毒（HCV）基因型1a NS3蛋白与配体的相互作用机制和动力学进行了表征。作者以NS3蛋白酶抑制剂系列及代表NS4A辅因子的肽段为分析物，发现NS3与NS4A及多种抑制剂的结合均呈异质性，可能反映NS3存在两种稳定构象。NS3–NS4A相互作用包含高亲和力（KD...
随着食品安全与动物掺假监测需求增加，亟需可同时进行生物标志物谱分析和多种化学污染物/毒素检测的生物传感器。表面等离子共振（SPR）是无标记检测技术，通过监测特异性生物分子识别元件与其结合伙伴的结合，实时反映传感器表面质量变化。本文开发了一种微流控固定装置，可在单一SPR芯片表面以线性阵列共价固定最多16种结合伙伴，并与原型多路SPR...
本文展示了提高 ProteOn XPR36 生物传感器通量的方法，使其能够同时表征多种多路复用格式，例如 36 个靶向同一抗原的不同单克隆抗体，并支持详细的表位分箱与表位映射研究。采用这些方法测得的动力学速率常数与 Biacore 2000 的结果高度相关；ProteOn 藻酸盐基 GLC 芯片获得的绝对参数值与 Biacore 平...
细胞和动物模型研究表明，分子伴侣在体内控制蛋白错误折叠和淀粉样形成过程中发挥重要作用。此外，伴侣蛋白还参与酵母中朊病毒表型的出现、传播和清除。近年来，为阐明其机制，研究者详细考察了伴侣蛋白对淀粉样形成的影响。体外直接研究伴侣蛋白对淀粉样纤维形成的影响是重要途径。本综述介绍了常用于控制和监测纤维形成时间过程、以及检测伴侣蛋白与成纤维蛋...
微阵列与生物传感器的功能依赖于在表面固定生物分子并保留其生物活性。本文报道了一种基于二乙烯砜（DVS）的简化表面功能化方法，用于在羟基终止表面上共价固定天然及化学衍生碳水化合物和糖蛋白。首先，在羟基自组装单分子层上引入 DVS，形成乙烯砜活化表面；随后，含羟基、氨基或巯基的糖、寡糖、多糖及糖蛋白通过 Michael 1,4-加成反应...
肉毒神经毒素（BoNTs）是已知毒性最强的物质之一，食品与血清中快速检测 BoNTs 对监测和诊断至关重要。本研究建立了一种在数分钟时间尺度上特异性检测肉毒神经毒素B（BoNT/B）蛋白酶活性的体外无标记检测方法。以突触囊泡膜蛋白 VAMP2 为天然底物，利用实时表面等离子共振（SPR）监测特异性抗体芯片对囊泡的捕获。该体系在低离子...
高亲和抗体–抗原结合参数的测定对治疗性抗体筛选、牛体内激素检测及临床免疫分析很重要。无标记测定常将一种结合伙伴固定在生物传感器芯片上，再监测另一伙伴的结合平衡；但当解离常数达皮摩尔或更低时，平衡时间过长，只能分析吸附/解离动力学。本文评估一种新方法：沉淀增强免疫检测–椭偏仪（PEIA-ellipsometry），利用溶液中结合平衡比...
目前公认乳寡糖可通过干扰病原微生物黏附到人类细胞而直接抑制其感染。许多乳源游离寡糖是上皮细胞表面碳水化合物的可溶性受体类似物，可作为受体诱饵使病原菌优先结合，从而减少宿主细胞黏附。然而，目前快速筛选此类寡糖的方法很少，相关研究多依赖耗时的人细胞系感染模型，因此需要一种快速、灵敏的方法检测微生物与乳寡糖的结合。本研究建立了多种基于生物...
高迁移率族蛋白1（HMGB1）是炎症晚期介质，其细胞因子活性主要由晚期糖基化终末产物受体（RAGE）介导。由于HMGB1具有肝素结合活性，本研究探讨肝素是否干扰HMGB1/RAGE相互作用并抑制其细胞因子活性。作者采用荧光光谱、圆二色谱和表面等离子共振（SPR）生物传感器技术评估肝素对HMGB1构象及HMGB1/RAGE结合的影响。...
金纳米粒子（Au-NPs）常用于放大表面等离子共振（SPR）信号，但严重非特异吸附限制了其实际应用。本文开发了一种不受非特异吸附影响的Au-NPs增强SPR生物传感器：利用RsaI内切酶将Au-NPs从传感器表面切割下来。为进一步提高灵敏度，作者对探针DNA进行了特殊设计。切割反应后，残余探针DNA形成发夹结构，引起SPR谷偏移的显...
脓毒症治疗仍具挑战。细菌脂多糖（LPS）和细菌DNA/CpG DNA是脓毒症的重要致病分子和药物靶点，发现能同时中和两者的化合物具有治疗价值。本研究展示基于生物传感器的双靶点（LPS和CpG DNA）导向药物发现策略，从传统中药中筛选和分离抗脓毒症活性组分及单体。首先将LPS或CpG DNA固定在生物传感器比色皿表面建立筛选平台，从...
为建立高效、可靠地预测药物候选物血清蛋白结合的方法，作者利用表面等离子共振（SPR）生物传感器研究了若干化合物与人血清白蛋白（HSA）及α1-酸性糖蛋白（AGP）相互作用的动力学特性。传统基于合理机理模型、通过速率常数或亲和力进行定量的方法仅适用于少数化合物；部分化合物可估计主要相互作用的亲和力及低亲和力次要相互作用的贡献，但许多化...
本文报道了一种无标记钙离子生物传感器的构建与表征。作者将猪源 S100A12 蛋白（calgranulin c）与聚乙烯醇丁醛（PVB）混合后，通过溶胶-凝胶法固定在金电极表面，形成 Au-PVB-S100A12 修饰电极。采用循环伏安法（CV）、电化学阻抗谱（EIS）、扫描电镜（SEM）和表面等离子共振（SPR）对电极进行表征。S...
光学生物传感器用于研究大分子相互作用日益普及。仅2007年就有1179篇涉及生物传感器数据的论文，其数量与多样性使新用户难以积累和解读。本章旨在为读者提供准备、设计并高效执行Biacore动力学实验所需工具，引导用户理解基础理论、系统维护和检测设置，并提供实用技巧。许多基于动力学的筛选实验在分析前需要严格的样品制备和纯化。为突出这些...